构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗.docVIP

构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 [摘要] 目的 构建免疫球蛋白重链可变区（IgHV）基因片段与细胞因子GM-CSF或IL-2的融合基因表达载体作为家族特异性抗淋巴瘤核酸疫苗，接种动物了解该疫苗抗淋巴瘤免疫功能。方法 从脐带血免疫球蛋白基因文库810个IgHV3/Bluescript克隆获得一些片段长度差异较大的基因片段，测序后利用生物信息资源分析预测其重链可变区的T细胞表位，同时分析本室以前构建的IgHV1６个片段。选择包含了绝大多数Ｔ细胞表位的IgHV1、IgHV3基因，分别将框架区(FR)为主的IgHV(FR)基因片段及IgHV(FR)与GM-CSF或IL-2基因连接后形成的融合基因克隆到真核表达载体pcDNA3.0中。表达载体通过脂质体转染COS细胞， ELISA法确定GM-CSF或IL-2的表达情况。将一些表达载体作为核酸疫苗免疫小鼠，通过间接免疫荧光法和细胞因子分泌法检测小鼠抗同一家族淋巴瘤和正常淋巴细胞的免疫反应。结果 分别将6个不同的IgHV3基因和６个IgHV1克隆测序，翻译为免疫球蛋白序列，利用Rammense计算机评分系统预测这些IgHV1、IgHV3序列上分别受HLA位点限制的T细胞表位，每个IgHV序列中约存在30个左右T细胞表位，90％以上的T细胞表位位于框架区，积分排位于前10％的T细胞表