内毒素、1，3-β-葡聚糖和降钙素检测的临床应用.ppt

美国四大医疗中心做的一项回顾性研究 死亡率(%) 诊断延迟时间(d) Garey KW et al. Clin Infect Dis 2006, 43:25–31 . b1,6 葡聚糖 磷脂双分子层 几丁质 麦角固醇 b1,3葡聚糖 合成酶 mannoproteins β1,3 真菌细胞膜、壁结构 羊毛固醇C－14去甲基化酶 14位还原和7－8位异构酶 角鲨烯环氧化酶 1-3-β-D-葡聚糖本质及特点 真菌细胞壁成分，占50%以上 1 其他微生物、动物及人的细胞不含该成分 2 用于侵袭性真菌感染的早期诊断 3 (1-3)-β-D-葡聚糖特性 1. 2. 3. 对热极为稳定，高压 121℃并不能使其灭活。 在念珠菌和曲霉菌细胞 壁中含量较多，对G 试验灵敏。 当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞的吞噬、消化等处理后，(1-3)-β-D-葡聚糖可从胞壁中释放出来，从而使血液及其它体液中含量增高。当真菌在体内含量减少时，机体免疫系统可将其清除。 在浅部真菌感染中，(1-3)-β-D-葡聚糖未被释放出来，故其在体液中的量不增高。 “G”试验缘何而来？ 1-3-β-D-葡聚糖可特异性激活鲎变形细胞裂解物中的G因子，引起裂解物凝固，故称G试验。 （1-3）?-D-Glucan LAL-RM(反应物) G因子 活化G因子 凝固酶原 凝固酶 凝固蛋白原 凝固蛋白（凝胶） 试验反应机理图： 内毒素与β-葡聚糖的检测比较 已知能与鲎试剂发生反应的物质有细菌内毒素和β-葡聚糖，但它们的反应曲线不一样。内毒素反应曲线为S型特征曲线，而β-葡聚糖反应曲线为经过0点的斜线。 ? 内毒素和β-葡聚糖与鲎试剂反应的特征曲线 观察期不确定，费时费力，特征性不明显并对医师的专业水平要求高 辅助方法：临床表现，免疫学，病理学，影像学检查等 用于实验室检测，已成为这一领域研究的热点 3.PCR技术：真菌的抗原、抗体及代谢产物的血清学检查和真菌核酸检测 对儿童及接受造血干细胞移植患者、ICU患者不适用 2.GM试验：曲霉属半乳甘露聚糖抗原检测。判断是否曲霉属真菌感染 耗时短，灵敏度高，特异性强，定量检测可判断感染严重程度 1.G试验：通过检测(1-3)-β-D-葡聚糖的含量，判断是否有真菌感染 非传统 检查 敏感性低，耗时长, 培养阳性率低。培养结果是定性的，有些标本采集困难 直接培养真菌法 传 统 检 查 特 点 方 法 侵袭性真菌感染的临床检测方法对比 ?－D－葡聚糖的评价 可检测多种致病真菌感染 念珠菌，曲霉，肺孢子菌，镰刀菌，地霉，组织胞浆菌， 毛孢子菌等 不能检测隐球菌、接合菌（根霉、毛霉、根毛霉、犁头霉等） 敏感性、特异性：90％左右 对于念珠菌血症, G试验检测是首选检查 J. Clin. Microbiol. 2008.46:1009–1013. BG值在IFI临床表现出现之前就已经高于正常值 Pazos等报道5例确诊IFI及3例临床诊断的IFI患者，发现BG值升高出现在发热、咳嗽、胸痛等症状和肺部HRCT检查发现以前 。 平均早于发热5 d 早于呼吸道症状平均10.7 d J Clin Microbiol，2005，43(1)：299—305 G试验检测评价 Odabasi等对确诊为粒细胞缺乏人群进行为期3周每周2次采血检测及临床观察 发现：BG值开始高于60 pg／ml的时间比最后确诊为IFI或临床诊断IFI平均提前了10 d Clin Infect Dis，2004，39(2)：199—205 G试验检测评价 ?－D－葡聚糖参考值 健康人： 　　 10 pg/ml 可疑感染：10 ~ 20 pg/ml 深部真菌感染： 20 pg/ml 关于G试验建议 G试验临床应用 1　明确诊断 　　（抗真菌药物治疗前） 　2　治疗效果监测 　　（抗真菌药物治疗后） 　3　连续2次采血进行G试验 临床细菌内毒素及(1-3)-?-D-Glucan检测的国内外发展 国外：血液（包括