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中药色谱指纹图谱双层次控制模型理论和应用讨论 　　天王补心丸(Tianwang Buxin pill，TWBXP)由丹参、当归、石菖蒲、党参、茯苓、五味子、麦冬、天冬、地黄、玄参、远志(制)、酸枣仁(炒)、柏子仁、桔梗、甘草和朱砂等16 味药材组成，是滋阴养血和补心安神名方。文献中有薄层扫描法、HPLC 法测定单组分或几个组分含量研究。本文深入探讨中药指纹图谱控制本质、质控模式和方法，对其进行深层次的理论分析，提出中药色谱指纹图谱双层次控制模式理论。从中药指纹图谱保留时间和相对保留时间(RT)进行色谱系统适用性鉴定和时间系统定量，对复制标准建立时的色谱检验系统进行鉴别。目前，国内外通行的标准指纹图谱是一个数学统计指纹图谱，借助于计算机软件技术来建立，因其固定不变性导致存在很多弊端。孙国祥等一直主张建立标准制剂控制模式，这也是中药指纹图谱发展的必然和归宿，因其符合当前国际关于药物质量控制的通行规范，是中药指纹图谱进行中药质控和质检的有效措施。 　　本文通过建立246 nm-TWBXPs-HPLC 指纹图谱，应用“中药色谱指纹图谱超信息特征数字化评价系统4.0”软件计算相对特征指纹图谱，以TWBXP 对照指纹图谱计算其特征指纹图谱(RCFP)作为控制指纹图谱检测系统的第一层次，作为系统适用性试验的一部分。用中药指纹图谱双层次控制模型理论评价TWBXP-HPLC 指纹图谱。本文首次透视中药指纹图谱国内外控制规律，找到了中药指纹图谱双层次控制理论的本质和方法。在正确地解析中药指纹图谱控制规律和模式同时，为中药标准制剂控制模式和定量指纹图谱模式走向中药工业化控制奠定了理论基础。中药指纹图谱从宏观角度对中药化学组分进行整体量化控制具有科学性和可靠性，符合中药经典理论- 整体论。中药标准制剂控制模式和中药定量指纹图谱控制模式为中药质量整体控制论完成理论和技术上的奠基。 　　1 中药色谱指纹图谱双层次控制模型理论 　　1.1 中药色谱指纹图谱的双层次控制模型 　　中药指纹图谱控制是双层次控制，第一层次控制采用特征指纹图谱控制模式[ 孙国祥等用各指纹峰相对峰面积(RA)对RT 作图得相对特征指纹图谱RCFP，简称特征指纹图谱]。RCFP 强调检测时样品图谱的RT 和RA与对应的RCFP 要高度一致性。RCFP 是对实物指纹图谱特征的升华，因此也称永恒指纹图谱，是中药指纹图谱的气态。中国药典委在中药指纹图谱技术指导原则中强调公布指纹图谱特征技术参数，其实就是有意无意地在利用RCFP 对色谱系统进行适用性控制与对色谱系统基本功能进行必要控制： 　　① 一直以来国内外没有注意到该技术层面在客观上存在巨大困难，其不应定位在对系统RT 和RA 变动幅度的控制方面(属于定量)，这机械地、理想化地和苛求地限制了中药指纹图谱的检验标准的适用性; 　　② 该方法建立在色谱系统高度重现的基础上，限制指纹峰RT 变动幅度和RA 变动范围必然扼杀中药和植物药产品的生命，源于该技术标准根本不符合客观规律，是机械论盛行导致的脱离现实; 　　③ 采用样品指纹图谱的RT 和RA 与特征指纹图谱的对应系列标准进行夹角余弦的定性鉴定作为色谱系统适用性试验(不低于0.90)的一部分内容最为合理，绝不能以幅度变动方式控制单一或几组指纹峰，事实上即使满足此标准也不代表产品质量的过关与合格; 　　④ 利用参照峰校正系数对 RCFP 进行准确校正后，可对样品进行准确地整体定量(因为这种校正返回原谱)。 　　第二层次控制采用实物指纹图谱控制即标准指纹图谱控制模式，其实质是色谱系统直接检测获得的标准色谱指纹图谱。 　　① 标准指纹图谱控制模式，目前国内外广泛采用了这种固定的标准指纹图谱控制模式，是基于研究时建立的统计指纹图谱为标准。因为一旦研究好标准指纹图谱这种固定模式后，检验人员和研究人员都不再考虑其应用时的检验系统与标准建立时所用的色谱系统之间的可能存在的任何差异，尽管第一层次对检验用色谱系统进行严格规定和规范，但检验色谱系统无法准确复制当初建立标准指纹图谱的色谱系统而使色谱条件真实状态的完全等价一致，两者之间存在巨大的矛盾和不可调和的不确定度。目前这是中药色谱指纹图谱的技术死角和无法克服的矛盾。因此这种指纹图谱也叫固体指纹图谱，代表图谱的一种固体状态，所以是呆板指纹图谱，保守不灵活和误差极大是其基本特征。 　　② 标准制剂控制模式，孙国祥教授在近十几年研究定量指纹图谱过程中始终提倡第二层次控制应采用标准制剂控制模式，以其(标准药材、标准饮片、标准提取物、标准配方颗粒和标准制剂)提取液即时检测采集色谱指纹数据作为标准指纹图谱，也称机动标准指纹图谱，之后马上检验样品指纹图谱，用前者直接测评后者。其完全消除了2 个色谱系统间可能存在的各种误差并符