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关于化橘红有效部位指纹图谱的研究 　　化橘红是岭南特色中药,收载于2010年版中国药典一部。化橘红为芸香科植物柚Citrusgrandis(L.)Osbeck及其栽培变种化州柚CitrusgrandisTomentosa’的未成熟或近成熟的干燥外层果皮。具有理气宽中、燥湿化痰的功效,用于治疗咳嗽痰多、食积伤酒、呕恶痞闷等症。现今市场上的化橘红药材多以柚来源为主。据文献报道,化橘红活性成分分为两大类:以柚皮苷为代表的黄酮类物质及香豆素类物质。但已有研究表明,化州柚药用成分含量比柚高,药用效果更佳。红珠胶囊是原创中药五类新药,其内容物是化橘红有效部位。目前,化橘红有效部位缺乏全面的质量控制方法,难以评价其质量的优劣,容易被仿制或掺伪。因此,建立化橘红有效部位的指纹图谱,具有实用价值。 　　1 仪器与材料 　　Ultimate3000DGLC高效液相色谱仪(美国戴安公司,DGP-3600SD双三元泵、SRD-3600脱气机、WPS-3000SL自动进样器、TCC3000-RS 柱温箱、DAD 检测器、Chromeleon6.8 数据处理软件);BP211D电子分析天平(德国Sartorius公司);KQ-250DE数控超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)。柚皮苷(批号:110722-200309,供含量测定用,中国食品药品检定研究院);野漆树苷(批号:A8906,质量分数gt;95%,美国Sigma公司);新北美圣草苷(批号:13241-32-2,质量分数gt;95%,美国Sigma公司);橙皮内酯水合物(批号:5875-49-0-BBP00486,质量分数gt;95%,云南西力生物技术有限公司)。化橘红药材由化州化橘红药材发展有限公司提供,经广东医学院附属医院李朝晖副主任药师鉴定为芸香科植物化州柚Citrusgrandis Tomentosa’的未成熟的干燥外层果皮。化橘红有效部位的提取方法:取化橘红,加12倍量水后浸泡过夜,提取1h,滤过,滤渣再提取2次,每次加12倍量水,每次提取1h,滤过,合并滤液浓缩至相对密度为1.10~1.15(70℃),加无水乙醇使乙醇浓度达到70%,放置12h,过滤,弃去滤渣,滤液回收乙醇至无醇味,浓缩至相对密度为1.10~1.15(70℃),放置,析出固体,滤过,干燥,即得。甲醇,色谱纯,Honeywell霍尼韦尔贸易(上海)有限公司;甲酸,色谱纯,美国Sigma公司;水为超纯水。 　　2 方法 　　2.1 溶液的制备 　　2.1.1 对照品溶液:分别取新北美圣草苷、柚皮苷、野漆树苷和橙皮内酯水合物对照品适量,加甲醇制成每1mL含新北美圣草苷、柚皮苷、野漆树苷和橙皮内酯水合物各0.1mg的混合对照品储备液,4℃冷藏备用。使用时将储备液稀释100倍作为对照品溶液。 　　2.1.2 供试品溶液:取化橘红有效部位粉末0.25g,精密称定,置100 mL 量瓶中,加甲醇适量超声(360W,35kHz)处理15min,加甲醇稀释至刻度,摇匀。用0.45mu;m 的微孔滤膜滤过,即得。 　　2.2 色谱条件 色谱柱为ZORBAXEclipsePlusC18(250mmtimes; 4.6mm,5mu;m);流动相为甲醇(A)-冰醋酸溶液(pH3.0)(B),梯度洗脱(0 min,30%A;50min,60%A);检测波长:320nm;流速:1.0mL/min;进样量:10mu;L。 　　2.3 共有峰确定 将上述得到的10批供试品溶液的高效液相色谱指纹图谱经“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2009版)进行比较,共有模式谱峰,分别为新北美圣草苷、柚皮苷、野漆树苷和橙皮内酯水合物。 　　3 方法学考察 　　3.1 精密度试验 取同一份化橘红有效部位供试品溶液连续进样6次,检测指纹图谱,采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2009版)进行评价,结果供试品溶液相似度均等于1.00,表明仪器精密度良好。 　　3.2 稳定性考察 取同一份化橘红有效部位供试品溶液,分别在0、2、4、6、8、12、24、48h进样,检测指纹图谱,采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2009版)进行评价,结果供试品溶液相似度均等于1.00,表明供试品溶液在48h内稳定。 　　3.3 重复性试验 取同一批化橘红有效部位供试品6份,按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液,分别进样,检测指纹图谱,采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2009版)进行评价,结果供试品溶液相似度均等于1.00,表明方法重复性好。 　　3.4 中间精密度 精密称取同一批号的化橘红有效部位,分别在不同日期、不同分析人员等变动因素条件下测定,检测指纹图谱