德阳地区结核分枝杆菌耐药基因突变位点的分布及基因型耐药的探究.docVIP

德阳地区结核分枝杆菌耐药基因突变位点的分布及基因型耐药的探究 结核分枝杆菌是重要的致病菌，WHO 报告 2012年全球大约有 860 万新发结核病患者，中国约有 100万结核病患者，其中耐多药结核患者约占 5.7%，而再治疗的结核病患者中耐多药结核患者约占 26%。结核分枝杆菌对异烟肼及利福平同时耐药即为耐多药结核，该病严重阻碍了结核病防治的进展，已成为全球严重的公共卫生问题。结核杆菌分离培养及菌种鉴定是目前较常用的方法，该方法检测周期长，检出率较低，不利于及时指导临床诊疗。结核分枝杆菌耐药基因检测是一种快速、灵敏度高、特异性强的检测方法，有利于指导临床的诊断和治疗。目前常见的基因突变位点分别为利福平 rpoB 基因的 511、513、516、519、522、523、526、529、531 及 533 位 点，异 烟 肼katG 基因的 315 位点和 inhA 基因的 -15 位点，链霉素 rpsL 基因的 43 及 88 位点及乙胺丁醇 embB 基因的306 位点等。我院分子生物学实验室在2010年2月－2013 年 3 月共检测出结核分枝杆菌 DNA 阳性的肺结核患者 257 例，对上述患者的标本进行耐药基因突变位点检测，探索本地区结核分枝杆菌的耐药基因突变位点的分布特点及基因型耐药情况，现报告如下。 1　资料与方法 1.1　一般资料 收集我院临床分子生物学实验室 2010 年 2 月－2013 年 3 月所有送检痰液标本中结核分枝杆菌 DNA阳性的257 例患者标本（排除重复送检及同一患者送检的标本），其中男198例，女59例；年龄10～86岁，平均（50.5 plusmn; 19.6）岁。所有结核分枝杆菌 DNA 阳性标本均保存于minus;70℃冰箱冻存并统一进行耐药基因突变位点检测。肺结核依据原卫生部 WS 288－2008 肺结核的诊断标准。本研究方案通过德阳市人民医院伦理委员会审查。 1.2　仪器和试剂 结核分枝杆菌核酸检测试剂盒购自凯杰生物工程（深圳）有限公司，采用瑞士罗氏公司 LightCycler480 进行检测。结核分枝杆菌核酸采用美国伯乐公司PTC-200 型梯度聚合酶链式反应（PCR）分析仪进行PCR 扩增。结核耐药突变基因检测试剂盒购自亚能生物技术（深圳）有限公司。 1.3　检测方法 结核耐药突变基因检测试剂盒采用基因芯片技术，检测 rpoB、katG、inhA、embB、rpsL 等 5 个结核耐药基因的 13 种耐药突变位点，提示对利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇等 4 种一线抗结核药物的耐药性（表 1）。本研究按照结核耐药突变基因检测试剂盒说明书完成对结核 DNA 阳性标本的 PCR 扩增、杂交及显色等操作，根据试剂盒说明书进行检测结果判定。 表 1 结核分枝杆菌基因突变位点所对应的耐药信息 1.4　统计学方法 采用 SPSS 17.0 软件进行统计分析，计数资料采用 chi;2检验，P 值＜ 0.05 为有统计学意义。 2　结果 2.1　结核分枝杆菌耐药基因突变位点的检测结果 257 例肺结核患者中结核分枝杆菌耐药基因突变位点全部为野生型者 208 例（80.93%）；至少 1 个位点突变者 49 例（19.07%），其中单个位点突变者 27 例（10.51%），2 个或 2 个以上位点突变者 22 例（8.56%）。 2.2　肺结核患者结核分枝杆菌耐药基因突变位点的分布情况 257 例肺结核患者的痰液标本中检测出 49 例存在耐药基因位点突变，其中 katG 315 位点和 inhA-15位点突变分别为 30、7 例；rpoB 531、526、516 位点突变分别为 10、1、1 例，511 或 513 位点突变 4 例，526或 529 位点突变 1 例；embB 306 位点突变 11 例；rpsL43 和 88 位点突变分别为 18、5 例，而其他位点未检测出耐药突变位点。全部耐药突变位点中，katG 315位点突变最多，突变率达 11.67%（30/257），其次分别为 rpsL 43 位点突变（7.00%）和 embB 306 位点突变（4.28%）。见表 2。 表 2 肺结核患者结核分枝杆菌耐药基因突变位点的分布 2.3　肺结核患者的基因型耐药的分布情况 257 例肺结核患者中，初治肺结核患者 234 例，复治肺结核患者 23 例。初治肺结核患者中单耐异烟肼、利福平和链霉素的患者分别为 11 例（4.70%）、3 例（1.28%）和 7 例（2.99%），未检测