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浅析细菌多糖中氧乙酰基特性的研究进展 　　许多细菌表面多糖，如荚膜多糖、胞外多糖、肽聚糖以及脂寡糖等都被不同程度的氧乙酰化修饰。以荚膜多糖为例，它是一种重要的毒力因子，也是细菌性多糖疫苗和结合疫苗的主要成分。有研究表明在脑膜炎球菌 A、C、Y、W135、H、I、K 以及 29E 群荚膜多糖，大肠杆菌 K1 型荚膜多糖，金黄色葡萄球菌5 型和 8 型荚膜多糖，肠道沙门菌伤寒 Vi 多糖，肺炎球菌1、7F、9V、11A、15B、17F、18C、20、22F 和33F型荚膜多糖，B 群链球菌 Ia、Ib、II、III、V 和 VI 型荚膜多糖中都存在不同程度的氧乙酰化修饰。以荚膜多糖为主要成分的疫苗，在荚膜多糖的纯化、衍生、结合过程中，氧乙酰基易受中性或碱性 pH 环境的影响而缺失，导致不同批次疫苗多糖中氧乙酰基含量存在差异。对细菌多糖中氧乙酰基特性的研究有助于理解氧乙酰化修饰对细菌功能和多糖免疫原性的影响。 　　1 细菌多糖合成机制及氧乙酰基修饰多糖机理 　　1. 1 细菌多糖合成机制 细菌荚膜多糖、胞外多糖以及脂多糖 O 抗原有着相似的合成途径，根据转运机制和糖基转移酶的差异，可以分为 3 种机制: Wzy依赖途径，合成酶依赖途径和 ABC 转运体依赖途径。其中 Wzy 和合成酶是指相应合成机制的聚合酶，这两种多糖合成机制广泛存在于革兰阴性菌和阳性菌中，而 ABC 转运体依赖途径目前只发现存在于革兰阴性菌中。 　　1. 1. 1 Wzy 依赖途径 这一途径主要发生在脂多糖 O 抗原的合成过程中。除 3 型和 37 型外，其他血清型的肺炎球菌荚膜多糖也都以此机制合成。以2 型肺炎球菌荚膜多糖为例，其合成途径分为三个阶段。起始阶段以胞质中糖核苷酸为供体，脂载体十一异戊烯磷酸( Und-P) 为糖受体，糖基转移酶 Cps2E 催化反应。接下来单糖单元通过翻转酶Wzx 从细胞内膜表面翻转到外周质空间，以非渐进性聚合酶 Wzy 聚合形成长链的重复单位。最后共价链接到肽聚糖或者细胞膜表面。脂多糖 O 抗原的合成过程和上述途径类似，但是最后链接的是外膜脂质 A 的核心区域。 　　1. 1. 2 合成酶依赖途径 与 Wzy 途径不同，该途径最显著的特点是在多糖合成的起始阶段、聚合阶段以及转运过程中只有一种酶参与。3 型和 37 型肺炎球菌荚膜多糖、透明质酸以及纤维素均由该途径合成。以3 型肺炎球菌荚膜多糖合成为例，参与反应的合成酶是一种渐进性 beta;-糖基转移酶，在多糖链的延伸过程中伴随着长链转运出细胞膜。相比Wzy 途径，由该途径合成的多糖重复单位都较为简单，一般只含有一种或两种单糖，糖链最后链接的是磷脂酰甘油而不是肽聚糖。 　　1. 1. 3 ABC 转运体依赖途径 该途径主要发生在脑膜炎球菌荚膜多糖，部分型别的大肠杆菌 O 抗原的合成过程中。与前两种合成途径不同，在该途径中多糖链的合成是在细胞内膜胞质面完成的，通过 ABC 转运体将合成的糖链转运至细胞膜表面。ABC 转运体有许多细胞学功能，包括运送营养物质、蛋白质以及多糖。其结构主要包括两对跨膜结构域 TMs 和 NBDs 以及两对辅助蛋白 KpsE 和KpsD。NBDs 结合的 ATP 水解后诱导 TMs 结构改变，从而将合成的多糖链运送至胞外。KpsE 和KpsD 促进多糖链从内膜胞质面翻转到细胞膜表面。在多糖链的合成过程中，不同型别的脑膜炎球菌荚膜多糖糖基转移酶并不相同。B 群和 C 群脑膜炎球菌糖链的延伸是通过一种单一结构域的多聚唾液酸转移酶完成的，而 Y 群和 W135 群糖链的延伸是通过一种含有两个结构域的糖基转移酶完成的，分别为氨基端的己糖基转移酶和羧基端的唾液酸转移酶。 　　1. 2 氧乙酰基修饰多糖机理 　　1. 2. 1 细菌肽聚糖氧乙酰化的 OatA 和 PatA /PatB途径 肽聚糖是细菌细胞壁的主要成分，也是宿主细胞固有免疫系统中溶菌酶的主要目标。肽聚糖氧乙酰化可以保护细菌不被溶菌酶降解，从而在宿主体内诱导一系列病理生理学行为，如激活补体、发热反应等[7]。其氧乙酰化位点是 N-乙酰胞壁酸残基的 C-6 羟基。氧乙酰化程度因菌种和培养条件不同而有差异，在20% ～70%之间。细菌肽聚糖氧乙酰化是细菌成熟的标志事件，两种不同的酶系统都参与了这一事件。革兰阳性菌通过一种跨膜的肽聚糖氧乙酰基转移酶( OatA 或OatB) ，将乙酰基从胞质内乙酰辅酶 A 转移至细胞膜外肽聚糖相应的乙酰化位点上[8]。在革兰阴性菌中也发现了类似的由两种蛋白构成的酶系统，跨膜的肽聚糖氧乙酰基转移酶 A ( PatA) 作为乙酰基的转运蛋白，周质的肽聚糖氧乙酰基转移酶 B( PatB) 则负责将乙酰基从 PatA