第4章 PCR技术的应用幻灯片.pptVIP

Gene splicing and mutagenesis by PCR-driven overlap extension Karin L Heckman Larry R Pease Nature Vol2 :924-928 核酸序列比对 /Blast.cgi BLAST分析界面 输入测序结果 结果界面之一 结果界面之二 九、PCR污染的产生及防治 PCR污染的监测 PCR强大扩增能力+检测的敏感性 经30个周期后，特定DNA片段的数量在理论上可增加109倍 极微量的污染便可导致假阳性，尤其对定量造成很大的问题 NTC (No Template Control): 必须设置一个不含模板DNA但含有PCR系统中所有其他成分的对照反应，这一对照管须在准备好所有其他PCR以后才进行吸加。 常见的PCR contamination 常规PCR 荧光定量PCR NTC 4 3 2 1 7 6 5 9 8 NTC 引起PCR污染的原因 模板间交叉污染 容器被污染 模板放置时, 由于密封不严溢于容器外 容器外粘有模板而造成相互间交叉污染 模板吸取过程中, 因气溶胶（aerosol）或其他原因引起移液器污染，从而导致交叉污染 引起PCR污染的原因 PCR试剂污染 PCR 试剂配制过程中, 移液器、容器、水等原因造成试剂被PCR