DcR3基因在大肠癌组织中的表达及其对机体免疫平衡影响的实验研究.pptVIP

DcR3基因在大肠癌组织中的表达及其对机体免疫平衡影响的实验研究 河北医科大学第四医院外二科 张振亚 随机选取河北医科大学第四医院外二科2007年6月～2007年12月间住院行外科手术治疗的结直肠患者30例。 N：Normal colorectal mucosa C：Primary colorectal cancer Table1 Comparison of CD4T cells, CD8T cells and CD4T/CD8T in blood serum between colorectal carcinoma patients and health adults * * 诱骗受体3(DcR3)是肿瘤坏死因子受体家族成员，和某些配体的受体蛋白分子特异性结合，会导致机体免疫失衡，机体内Th1细胞下降，Th2细胞趋高的变化，免疫平衡向Th2型偏移，本研究旨在探讨DcR3基因表达与大肠癌患者机体免疫平衡的关系。 标本采集 正常大肠粘膜 组织标本 大肠癌组织 血液标本 大肠癌患者空腹静脉血 健康人空腹静脉血 血液标本 手术标本 DcR3基因表达 T细胞亚群检测 细胞因子检测 DcR3基因表达对免疫平衡的影响 RT-PCR (1) DcR3： 扩增片段大小为426bp 上游序列: 5-TCCACCGCGCCACTACAC-3‘ 下游序列: 5-ACGGCACGCTCACACTCC-3‘ (2)β-action: 扩增片段大小为224bp 上游序列：5-TTCCAGCCTTCCTTCCTGG-3‘ 下游序列：5-TTGCGCTCAGGAGGAGCAAT-3‘ Fig.1 The electrophoresis result of DcR3mRNA and β-action DCR3 426bp βaction 224bp 500bp 400bp 300bp 200bp C N Fig.2 The expression level of DcR3mRNA in normal colorectal and primary colorectal cancer 3 吸取薄层中游离细胞加入PBS洗涤 2 室温下离心形成淋巴细胞薄层 取抗凝血稀释后加入淋巴细胞分离液 1 4 取80μl细胞悬液离心涂片 T淋巴细胞亚群的检测 CD4T细胞 CD8T细胞 Fig.3 The image of CD4 positive T cells and CD8 positive T cells of health adults in peripheral blood Fig.4 The image of CD4 positive T cells and CD8 positive T cells of colorectal carcinoma patients in peripheral blood CD4T细胞 CD8T细胞 结果 1.20±0.42 26.96±7.47% 30.37±11.29% 正常人 0.93±0.48* 34.81±11.55%* 26.31±8.78% 大肠癌 CD4T/CD8T CD8T细胞 CD4T细胞 组别 *P0.05 分别将标准品和标本加入3个复孔，混匀后封板，37℃孵育 反复洗板后加入一抗体工作液，封板，37℃孵育 加入酶标抗体工作液，封板 加入底物工作液避光37℃孵育 加入终止液 细胞因子检测 将反应板置于酶标仪检测板上，测定样品492nm处吸光值，以标准品1000、500、250、125、62、31、16、0.001pg/ml之OD值在半对数纸上作图，画出标准曲线，根据样品OD值在该曲线图上查出IFN-γ及IL-4血清含量。 细胞因子检测 1.82±0.35 5.20±1.71 9.18±2.31 正常人 0.70±0.10** 8.88±1.30** 6.26±1.43* 大肠癌 IFN-γ/ IL-4 IL-4(pg/ml) IFN-γ(pg/ml) 组别 Table2 Comparison of IFN-γ