实验8Folin-酚试剂法测定蛋白质含量（Lowry基本法）.pptVIP

实验8 Folin-酚试剂法测定蛋白质含量（Lowry基本法） 一 目的与要求 Folin-酚试剂法测定蛋白质含量的原理和方法。 二 实验原理 Folin-酚试剂（Folin-phenol reagent）的显色原理主要是：试剂中的磷钼酸-磷钨酸混合物被蛋白质还原，形成多种还原型的混合酸，并且有特殊的蓝色。包括两步反应。 ㈠ 试剂甲使蛋白质发生烯醇化反应，在碱性条件下，形成蛋白质-铜络合物，从而使电子转移到混合酸中，大大地增强了酚试剂对蛋白质的敏感性。 ㈡ 试剂乙（磷钼酸-磷钨酸混合液）受蛋白质中半胱氨酸、酪氨酸、色氨酸和组氨酸等作用，使钨酸、钼酸两者同时失去1个、2个或3个氧原子，还原成含有多种还原型的混合酸，并且有特殊的蓝色。 利用蓝色深浅与蛋白质浓度的关系，可制备标准曲线，测定样品中蛋白质含量。本法可测定的蛋白质含量为15-280?g/mL。 三 操作步骤㈠ 标准曲线制作 ⒈ 取试管6支，编号。按表7-2操作，加入牛血清白蛋白标准溶液（200?g/mL），补足蒸馏水，使各管容量达1mL。算出各管中实际蛋白质含量，然后按顺序加入定量试剂甲、乙（各管加入乙试剂必须快速，并立即摇匀！），在分光光度计以上波长500nm比色，读取光密度。 2. 以各标准溶液浓度为横坐标，各管的光密度为纵坐标作图，得标准曲线。 标准曲线必须从零点开始出发，最好能成一直线。画好后，注明所用