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电泳技术 (Electrophoresis Technology) 钟树荣（PhD，副教授） 昆明医科大学法医学院 一、电泳的概念 电泳（electrophoresis）是指在电解质溶液中，带电颗粒在外加电场的作用下，以不同的速度向着与其电荷相反的电极移动的现象。 许多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团，它们在某个特定的pH值下可以带正电荷或负电荷。利用电泳现象对某些化学或生物物质进行分离、分析或提纯的方法和技术叫电泳技术。 COO- COO- COOH ╱ + H+ ╱ + H+ ╱ Pr ←————→ Pr ←————→ Pr ╲ + OH- ╲ + OH- ╲ NH2 NH3+ NH3+ PHPI PH=PI PHPI 二、电泳用于分离物质的原理： (The principle of electrophoresis is used to separate materials) 1、以生物大分子为例阐明电荷来源： 而核酸，无论是RNA还是DNA，由于含有丰富的磷酸基团，所以在PH4.0时，带净的负电荷。 2、带电颗粒在电场作用下所受的力： (Charged particles under the action of electric field force) 电场力 F = qE 阻力 Ff = fν q — 带电颗粒所带的有效电荷； E — 电场强度； ν — 带电颗粒在电场中的迁移速度； f — 平动摩擦系数 F =Ff qE = fν 对于一个球形带电颗粒，服从Stoke定律，即： f = 6π r η r 为带电颗粒的表观液态动力学半径， η 为介质粘滞系数。 当电泳达到平衡时，带电颗粒匀速运动: (When electrophoresis balance, electrically charged particles in uniform motion) ∴ ν = qE ／ 6π r η ν = qE ／f 带电颗粒在电场中的差速迁移是电泳分离的基础。 3.影响电泳速度的因素：(The influencing factors of electrophoresis rate) 样品本身：带电量，分子大小，形状 电场强度： 缓冲液：成分， pH ，离子强度 支持介质的筛孔大小 ： 支持介质：电渗作用，吸附作用 电渗 ν = qE ／f = qE ／ 6π r η 三、电泳装置Electrophoresis apparatus 电源(power supply) 水平式电泳槽 (Horizontal electrophoresis tank) 垂直式电泳槽 (Vertical electrophoresis tank) 按支持介质种类不同分为： 惰性介质(Inert medium)：起支持作用，减少对流，介质本身不参与电泳分离 纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、硅胶电泳、氢氧化铝电泳 凝胶介质(The gel medium)：起支持作用，减少对流，介质本身参与电泳分离琼脂糖凝胶电泳、淀粉凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳 2. 按支持介质形状不同分为: 薄层电泳 、 板电泳 、 柱电泳 四、电泳的分类 (The classification of electrophoresis) 3. 按电泳槽方向不同分为： 水平电泳、垂直电泳 4. 按用途不同分为： 分析电泳、 制备电泳 5. 按所用电压不同分为： 低压电泳（100V～500V ）、高压电泳（1000V～5000V） 6. 按分离原理不同分为： 移动界面电泳（自由界面电泳）、区带电泳、等速电泳、 等电聚焦电泳、免疫电泳 7. 按样品是否经过还原剂处理分为： 还原电泳、非还原电泳 8. 按凝胶介质中是否加入变性剂分为： 变性电泳、非变性电泳 9. 按电泳系统的均一性分为： 连续电泳、不连续电泳 10. 按样品被分离时凝胶介质的pH不同分为： 酸性电泳（pH=4.3）、碱性电泳（pH=8.8） 琼脂糖凝胶电泳 (Agarose