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实验十一 离体蛙心灌流 一、目的要求 1. 学习斯氏离体蛙心灌流方法； 2. 了解心肌的生理特性； 3. 观察Na＋、K＋、Ca2＋肾上腺素（Adr）、乙酰胆碱（Ach）等对离体心脏活动的影响. 二、基本原理 心肌具有自动节律性收缩活动的特性，离体心脏用理化性质近似于血浆的生理溶液（任氏液）进行灌流，以保持其新陈代谢顺利进行，这种节律性可维持较长时间。 心脏正常节律性活动有赖于内环境理化因素的相对稳定，所以改变灌流液成分，则可引起心脏活动的改变。 三、动物和器材 蟾蜍 斯氏蛙心套管、常用手术器械、棉线、蛙心夹、套管夹、张力换能器、生理实验系统、蜡盘、滴管、培养皿、 任氏液、 0.65％ NaCl 溶液、5%NaCl溶液、2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1：5000肾上腺素溶液、1：10000乙酰胆碱溶液、肝素生理盐水 四、方法和步骤 1、双毁髓 2、暴露心脏 3、辨认血管和心脏 4、灌流 2、用斯氏蛙心套管法制备离体蛙心 1）在左主动脉下穿一线，离远心端结扎；再在左右主动脉下穿一线，打活结备用。?? 2）蛙心插管内预放一定的肝素任氏液。 3）在左主动脉上剪一小囗，将蛙心插管缓缓插入，在穿过主动脉囗时要在心脏收缩期插入（？），注意 不要太深（？），如果出现插管内液面上下移动表示插管成功，稳住插管，提起备用线，连同插管扎紧，并固定在上面的玻璃钩上。 2、用斯氏蛙心套管法制备离体蛙心 4）用任氏液冲洗管内血液。 5）轻轻翘起插管和心脏，在下面穿一总线，认清静脉窦的位置，远离静脉窦结扎，结扎时逐渐用力，保持心脏正常跳动，如出现停博，松线再将线外移（？） 。 6）再洗血液，直到无色。 3、连接仪器并记录正常心搏曲线 1）用蛙心夹在心脏舒张期夹住心尖部，蛙心夹上的系线与换能器相连。 2）启动PCLAB—UE，将换能器信号输入CH1。 3）记录正常的收缩曲线，注意心脏的收与缩和记录波形上与下的关系。 4、实验观察 1)于套管内灌注0.65％ NaCl 溶液 2)于套管内滴加2—6滴5%NaCl 溶液 3)于套管内滴加1—2滴1%KCl溶液 4)于套管内滴加1滴2%CaCl2溶液 5)于套管内滴加1—2滴1：5000肾上腺素溶液 6)于套管内滴加1—2滴1：10000乙酰胆碱溶液 五、注意事项 1、制备蛙心标本时，勿伤及静脉窦 ２、心脏插管时，切勿戳穿心壁 ３、各种液体滴管要专用，不可混用 ４、每次加药一旦出现心搏曲线变化，则立即换液清洗至心搏恢复正常，冲洗一般2-3次 ５、为准确进行蛙心灌流的实验,必须对周围分布的血管正确指认,保证在操作过程中不会损伤血管而造成大量出血而导致实验失败 五、注意事项 ６、每加一种溶液要用滴管混匀，以免所加溶液浮在上面，不易进入心脏，并在加药后立即打上标记 ７、换液时不要碰到插管，以免影响基线 ８、保持每次液面一致，以1.5 cm 为宜 ９、随时用任氏液润湿蛙心表面 * *