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第十二章 核素示踪原理及实验设计 第一节 核素示踪的基本知识 一、核素示踪原理 (一) 示踪实验（racer experiment）的原理 (二) 应用及意义 二、示踪方法的特点 （一）放射性示踪方法的优点： （二）稳定核素示踪方法的优点 三、示踪剂 示踪剂（racer）是一些有特殊标记、很容易被测定并与其核素和化合物区分的核素及其标记化合物。放射性核素和稳定核素都可作示踪剂。前者由于核素发射出的射线，能比较容易地被放射性探测器定量地测定出来。而稳定核素由于质量不同于相应的元素，可借助质量分析仪，如质谱仪、气相层析仪、气质联用仪、液质联用仪和核磁共振仪等定量测定出来。 四、示踪研究的基本类型 （一）物理示踪 （二）化学示踪 第二节 示踪实验设计的基本过程 一、示踪实验的基本程序 （一）基本程序 （12.1） 若Tp与Tb相差20倍以上时，其有效半衰期（Te）基本等于其中那个短的半衰期。例如，14C标记物（Tp=5,730 a，Tb=10 d）所以能够作为示踪剂被安全地使用于体内和临床就是这个缘故。 （2）放射性核素标记的位置 当研究物质转运规律时，追踪观察的是原示踪物的去向，而不是追踪其代谢产物，故只要求标记原子牢固便可。又如研究氨基酸脱羧基反应，应将示踪原子牢固地定位标记在羧基上，否则在实验过程中会脱离化合物，失去实验意义。有些实验不要求特殊定位标记的化合物，可采用均匀标记。可是在使用均匀标记物时，要尽量除去化合物中不稳定位置上的标记原子，以免造成实验误差。 （3）示踪剂要有足够的放射性核素纯度、放射化学纯度（放化纯度）和比活度 为避免不同放射性核素的干扰，减少对实验对象的不必要的照射，要求放射性示踪剂的放射性核素纯度应达到规定的标准，即98％以上。在使用其标记化合物时，也应满足规定的纯度，即放化纯度为95％以上。 此外，放射性示踪剂应有相当高的比活度，这是因为示踪剂引入研究体系或机体后立即被稀释。如示踪剂比活度太低，为满足测量的要求，引入的化学量必定会大大超过生理剂量，使实验结果失去真实性。另外，有些示踪实验中，要求使用无载体的示踪剂，尤其当所研究的物质含量甚微时，载体的有无或其量的多寡，都能影响原有物质在体内的平衡。 （4）示踪剂剂量的选择 主要依据标记化合物的放射性比活度、放射性核素的半衰期；标记化合物在研究系统中或机体内被稀释的程度、利用率及在机体内的分布和排泄特点；实验周期、测量仪器的探测效率和示踪剂安全使用范围等因素。一般要求在整个实验中示踪剂被稀释后，样品脉冲计数率应5倍于本底计数即可满足要求（见第一章）。在实际工作中常用下式估算示踪剂的剂量： （12.2） A为示踪剂的比活度，B为本底计数，C为原示踪剂的用量，D为稀释倍数，E为探测效率。 一般来说，小动物实验的用量在7.4～18.5 kBq（0.2～0.5 μCi）范围内，更多的是在370 kBq（10 μCi）以下。离体实验如细胞培养、切片保温、酶反应等示踪实验，用量可小于37 kBq（1 μCi）。 （5）示踪剂的给予途径 整体动物实验的给药途径，和其他非放射性实验一样，不外乎经口、静脉、腹腔、皮下或肌肉注射。一般给药量小，要求体积准确。应防止损伤或漏出造成的污染。离体实验要根据研究目的，严格控制引入示踪剂的时间。 （6）样品的采集与制备 样品的采集要有代表性；脏器采样应固定解剖部位，同时要避免与其它他脏器和血液接触造成污染。进行代谢研究时，动物要饲养在代谢笼内，尤其是注射挥发性的放射性核素时，应有专门的气体收集装置。此外，还要注意的是样品的采集与制备须在相同的条件下进行，以免带来人为的误差。 （7）放射性测量方法的选择 不同能量的射线应采用不同的测量方法，如γ射线的测量，主要选用碘化钠晶体闪烁计数器。32P的测量可用G-M计数管，而目前多用液体闪烁计数器；而低能核素3H、14C则用液体闪烁计数器或薄窗G-M计数管进行测量；α射线可用带有硫化锌晶体的闪烁计数器、电离室和核乳胶测量，也可用液体闪烁计数器测量。 2．稳定核素示踪实验设计的基本要求 （1）核素的选择 可供示踪实验用的稳定核素有：2H、13C、15N、18O。但由于合成方便和费用低，氘成为最常选用的核素。 （2）示踪剂量 与放射性实验相比，稳定核素标记物的使用剂量较大。有时采用化学剂量，这在一些示踪动力学实验中应慎重考虑。 （3）丰度 示踪实验中不仅要求使用高纯度的标记物，同时也要求