PACE毛细管电泳操作手册-OperationalManualforMDQwith32KaratSoftware.doc

32 Karat TM Software ver 5.0 P/ACE MDQ操作手册 贝克曼库尔特有限公司 2002年12月15 日 目 录 第一章 毛细管电泳系统导论 第二章 P/ACE MDQ 毛细管电泳系统组成的概述 第三章 启动32 Karat 软件 第四章 直接控制 第五章 方法编辑 第六章 系统运行 第七章 积分 第八章 校准 第九章 定性分析 第十章 使用迁移率 第十一章 建立报告 特别声明和致谢: 1、本操作手册为试用本, 有不清楚的地方一律参照英文版原文，并以英文版原文为准。如发现有误之处，请通知贝克曼库尔特公司市场部，以便及时更正，公司市场部将不胜感激！ 2、贝克曼库尔特公司市场部特别感谢浙江省疾病控制中心任一平教授级高级工程师、福州大学中心实验室有关老师等协助我们完成了大量的工作。特此予以致谢！ 第一章 毛细管电泳仪的导论 概述 本资料说明毛细管电泳仪的一般原理和以P/ACETM MDQ为主机，带有紫外、二级管阵列和激光诱导荧光检测器的基本操作指导。 一般说明 P/ACETM MDQ是根据各种电泳的分离机理；在熔融石英玻璃毛细管中进行十七化合物分离的仪器。 在P/ACETM MDQ中，在压力、真空或电压的作用下样品进入毛细管后，在高电压的作用下，样品中的各种化合物以不同的淌度通过毛细管。 检测这些化合物有两种方法。其一利用化合物对紫外光具有吸收的原理，化合物在毛细管中通过毛细管的窗口，应用紫外或二极管阵列检测器检测起吸收值，将吸收光信号变成电信号传给计算机或积分仪。由计算机制作成电泳图而被分析。 第二个方法是利用化合物对特定发射光具有吸收并产生激发光的原理。这里由激光诱导荧光（LIF）来完成。在毛细管中的物质吸收激光诱导荧光检测器所产生的特定波长的发射光，激光诱导荧光检测器在测定、并记录其产生的激发光。再由计算机完成电泳图。 P/ACETM MDQ可以分离各种不同的样品，包括：肽类、蛋白、核酸、离子、手性化合物和药物。毛细管电泳比其他分析仪器需要更为少量的样品（5-30微升，进样的量仅仅5-50纳升）。它提供比其他分离技术更为理想的分析手段。 电泳基本模式 Capillary Zone Electrophoresis (CZE)毛细管区带电泳 毛细管区带电泳也称为自有溶液毛细管电泳，是毛细管电泳中最简单的一种形式。其分离机理是各被分离物质的净电荷与质量之间比值的差异，不同离子按照各自表面电荷密度的差异以不同的速度在电解质中移动，而导致分离。毛细管区带电冰要求缓冲液具有均一性，毛细管内各处具有恒定的电场强度。 Micellar ElectroPhoresis Capillary Chromatography（MEKC） 胶束电动力学毛细管色谱 在MECC中，当把离子型表面活性剂加入缓冲液中，并且其浓度足够大时这种表面活性剂的单体就结合在一起，形成一个球体我们称其为胶束。目前，以十二烷基硫酸钠（SDS）使用最为普遍。 在MECC的系统中存在两个相：流动的水相和起到固定相作用的胶束相，被分离物在这两个相之间分配，由于它们在胶束中具有保留能力而产生不同的保留时间。和区带电泳一样，缓冲液在管别壁处形成正电，使其显示强烈的向负极移动的电渗流，而SDS胶束由于其外壳带负电性具有向正极迁移的倾向。一般情况下，电渗流的速度大于胶束的迁移速度。因此，迫使胶束最终以较低的速度向负极移动。我们把这个移动的胶束固定相也称之“准固定相”。 在胶束电动力学色谱中，中性粒子之间的分离是根据其本身的疏水性的不同而达到的，不同疏水性的粒子和胶束的相互作用不同，疏水性强的作用力就大，保留时间就长；反之，保留时间就短。 Capillary Gel Electrophoresis（CGE）毛细管凝胶电泳 凝胶电泳是用凝胶物质作为支撑物进行分离的区带电泳。凝胶是一种固态分散体系，它具有多孔性，具有类似于分子筛的作用。被分离物在通过装入毛细管的凝胶时，按照各自分子的体积大小逐一分离，分子体积大的首先被分离出来，其后是较小的分子。 Capillary Isoelectric Focusing ( cIEF)毛细管等点聚焦 两性电解质在分离介质中的迁移形成pH梯度，各种具有不同等电点的蛋白质按照这一梯度迁移到它们的等电点的那个位置，并在该点停下，由此产生一条非常窄的聚焦区带，并使不同的蛋白质聚焦在不同的位置上。 毛细管等电聚