生化检验相关实验简化版.docVIP

血糖检测：--糖尿病 葡萄糖氧化酶法：过氧化物酶；4-氨基安替比林和苯酚氧化缩合生成红色的醌类化合物（Trinder反应）；505nm 己糖激酶法：NADPH 340nm 血清总蛋白检测： 微量凯氏定氮比色法：纳氏试剂（碘化钾汞复盐），棕黄色440nm 双缩脲法：540nm 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳分析：等电点不同，从正极开始：白蛋白，α1，α2，β，γ 血清白蛋白检测 电泳法 免疫化学法 染料结合法（溴甲酚绿BCG），最常用，无需分离白蛋白和球蛋白；蓝绿色630nm。 血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定--肝功能损害 赖氏比色法：丙氨酸，α-酮戊二酸；2,4-二硝基苯肼（腙）红棕色505nm 血清（尿）淀粉酶检测--急性胰腺炎 碘-淀粉比色法： AMY：淀粉酶 蓝色 660nm 血清乳酸脱氢酶测定—心肌梗死、肝病和某些恶性肿瘤 LD, 2,4-二硝基苯肼（腙）红棕色440nm 血清肌酸激酶（CK）测定—骨骼肌、心肌、脑组织，心肌梗死、多发性肌炎、休克 比色法：无机磷酸法、酶偶联丙酮酸测定法、肌酸显色法（常用）：ATP，肌酸与双乙酰和α-萘酚生成红色化合物；540nm 速率法 荧光分析法 血清碱性磷酸酶（ALP）测定—肝胆系统、骨骼系统 氨基安替比林比色法：ALP在碱性条件下使磷酸苯二钠水解，生成磷酸和游离酚，后者与4-氨基安替比林作用，并经铁氰化钾氧化成红色醌类化合物，510nm。 速率法：ALP在碱性条件下，使磷酸对硝基苯酚（4-NPP）释放出磷酸基团，生成磷酸基团和游离的对硝基苯酚（4-NP），形成黄色的醌，405nm 血清γ-谷氨酰基移换酶（GGT）测定—肝胆系统 底物：L-γ-谷氨酰-3-羧基-对硝基苯胺；受体：双甘肽，在GGT的催化下，谷氨酰基转移到双甘肽分子上，同时释放出黄色的3-羧基-对硝基苯胺， 405nm 血清三脂酰甘油测定—动脉硬化 分溶抽提-乙酰丙酮显色法：皂化反应、甘油、过碘酸。血清经正庚烷-异丙醇-稀硫酸分溶抽提，上层正庚烷相中含有中性三脂酰甘油，用氢氧化钾皂化生成甘油，在过碘酸的作用下甘油被氧化成甲醛，有铵离子存在时，甲醛和乙酰丙酮发生缩合反应生成黄色的3,5-二乙酰-2,6-二甲基吡啶，415nm 酶法：POD、4-AAP、4-氯酚三者合称PAP，故本法称GPO-PAP法。500nm 总胆固醇测定 异丙醇-高铁冰醋酸硫酸法：用异丙醇提取血清胆固醇，沉淀蛋白质，再用氧化铝吸附胆红素、磷脂、甘油等干扰物，向异丙醇胆固醇提取液中加入硫-铁显色剂，胆固醇与显色剂反应生成稳定的紫红色化合物。540nm 氧化酶法：血清中的胆固醇酯可被胆固醇酯酶（CEH）水解成游离胆固醇和游离脂肪酸，胆固醇在胆固醇氧化酶（COD）的氧化作用下，生成胆烷-4-烯-3-酮及过氧化氢，过氧化氢在4-AAP和酚存在时，经POD催化生成红色醌亚胺（Trinder反应），510nm 血清中高密度脂蛋白胆固醇测定 磷酸钨-镁法：用磷钨酸与镁离子作沉淀剂，选择性沉淀LDL和VLDL（主要含ApoB），上清液中只含HDL，用酶法测定胆固醇含量。 血清脂蛋白电泳分析--高脂蛋白血症 血清脂蛋白经饱和苏丹黑B预染色后，以琼脂糖为载体，在pH 8.6巴比妥缓冲液中进行电泳，根据各种载脂蛋白所带电荷量的不同，将脂蛋白分为不同区带，经测量得出各区带的相对百分比 自负极起，原点为乳糜微粒，依次为β、前β和α脂蛋白。 血清胆红素检测--肝脏疾病（溶血性黄疸、肝细胞性黄疸、梗塞性黄疸），胆道系统异常 改良J-G法：血清与醋酸钠-咖啡因-苯甲酸钠试剂（咖啡因试剂）混合后，加入氯化重氮苯磺酸（重氮试剂），生成紫红色偶氮胆红素，最后加入强碱性酒石酸钠溶液，使颜色不稳定的紫红色偶氮胆红素在咖啡因存在下转化为稳定的蓝色偶氮胆红素，600nm。（Hijman van den Bergh反应） 胆红素氧化酶法： 总胆红素测定：胆红素氧化酶，淡紫色化合物，460nm 可溶性结合胆红素测定：快反应，胆红素氧化酶，淡紫色化合物，460nm 血清麝香草酚浊度试验（TTT） 是血清浊度试验中的一种，它反映了肝脏对蛋白质代谢的功能状态，与血清蛋白质的质与量的改变有关。650nm 血清尿素（BUN）测定 二乙酰一肟检测法：二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的4,5-二甲基-2-氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。因二乙酰不稳定，故由试剂中二乙酰一肟与强酸作用产生二乙酰。 脲酶-波氏比色法：脲酶水解尿素产生2分子氨和1分子二氧化碳，氨在碱性介质中与苯酚及次氯酸钠反应，生成蓝色的吲哚酚阴离子，此过程需用亚硝基铁氰化钠催化反应，630nm。 酶偶联速率法：尿素经脲酶催化水解生成2分子氨及1分子二氧化碳，在谷氨酸脱氢酶催化下，氨与α-酮戊二酸和还原型辅酶Ⅰ（NADH）作用生成谷氨酸