041微生物限度检查法标准操作规程.doc

微生物限度检查法标准操作规程 部门/职务： Department/Post 签字/日期： Signature/Date 起草人： Prepared by 质量部/QC 年 月 日 审核人： Reviewed by 质量部/QC主管 年 月 日 批准人： Approved by 质量部/质量负责人 年 月 日 颁发部门 Issued by 质量部 执行日期 Effective Date 年 月 日 替换文件 Replaced For 《微生物限度检查法标准操作规程》（SOP-检验通则-0-02） 分发给 Distributed to 质量部 1.目的 规范微生物限度检查所用的培养基、检查方法、操作步骤、结果分析，以便对检品作出正确的微生物学评价。 本公司检品的微生物限度检查。胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基照g或10ml；膜剂为100cm2；贵重的或微量包装的供试品检验量可酌减。要求检查沙门氏菌的供试品，其检验量为20g。 5.2.4.2 供试品须取自2个以上的包装单位。 5.2.5 计数培养基适用性检査和供试品计数方法适用性试验 5.2.5.1 供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。 供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。 若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，计数方法应重新进行适用性试验。种藏中心获得的种为第7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加人3~5ml含0.05% (m l/m l)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氣化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。 5.2.5.5.2 菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2~8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2~8℃，在验证过的贮存期内使用。 5.2.5.6 阴性对照 5.2.5.7 培养基适用性检査 5.2.5.7.2 接种不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板或沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，置规定条件下培养。每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 5.2.5.7.3 被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5?2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。 5.2.5.8 计数方法适用性试验 5.2.5.8.1 供试液制备45℃。供试液从制备至加人检验用培养基，不得超过1小时。 5.2.5.8.1.2 常用的供试液制备方法如下。如果下列供试液制备方法经确认均不适用，应建立其他适宜的方法。 5.2.5.8.1.3 水溶性供试品： 5.2.5.8.1.3.1 取供试品，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或pH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1:10供试液。若需要，调节供试液pH值至6~8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。 5.2.5.8.1.4 水不溶性非油脂类供试品用-蛋白胨缓冲液，或pH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基制备成1:10供试液。分散力较差的供试品，可在稀释液中加人表面活性剂如0.1%的聚山梨酯806~8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。 5.2.5.8.1.5 膜剂供试品取供试品，剪碎，加无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基，浸泡，振摇，制成的供试液。若需要，调节供试液值至68。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。 肠溶制剂供试品取供试品，加人无菌磷酸盐缓冲液（用于肠溶制剂），置45水浴中，振摇，使溶解，制成的供试液。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。 接种和稀释 按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备