第一章蛋白质的结构与功能技术分析.ppt

三、蛋白质结构改变与疾病 （一）一级结构改变与疾病（分子病） 镰刀状红细胞性贫血，是一种蛋白质一级结构发生改变导致的血红蛋白异常病。 （二）空间结构改变与疾病（构象病） 蛋白质一级结构不变而仅其构象发生改变也可导致疾病发生，有人称此类疾病为构象病。例如肌萎缩性脊髓侧索硬化症。 第四节 蛋白质的理化性质 04 part 一、蛋白质的两性电离与等电点 ?1. 蛋白质是两性电解质 蛋白质分子中可解离的基团 多肽两端游离的α-氨基和α-羧基 多肽侧链R上解离的基团 决定蛋白质解离成正负离子的因素 蛋白质所含酸性和碱性基团的数目 蛋白质所在溶液的PH值 2.蛋白质的等电点（pI） 当蛋白质溶液处于某一pH值时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子或两性离子，净电荷为零，此时溶液的pH值称为该蛋白质的等电点（pI）。 体内大多数蛋白质的等电点在pH5.0左右，因而在生理条件下（pH7.35-7.45 ）以阴离子形式存在 。 3.电泳 带电粒子在电场中向电性相反的电极移动的现象。 蛋白质在带电场中泳动的速度和方向与其所带电荷的性质、数量及分子的大小、形状有关。带电荷多，分子小的泳动速度较快；反之则泳动较慢，从而达到分离蛋白质的目的。 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳可将血清蛋白分为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白。 A：染色后显示的蛋白质区带 B：光密度扫描定量分析 二、胶体性质 1.蛋白质有胶体性质 蛋白质是生物大分子，分子量在1万～10万之间，分子直径在胶体颗粒的范围（1~100nm），因此，蛋白质具有胶体的性质。 2.蛋白质亲水胶体稳定的因素 蛋白质分子表面的水化膜和同种电荷。破坏两个稳定因素，则蛋白质从溶液中析出而产生沉淀。 3.蛋白质胶体性质的应用 透析用于分离纯化蛋白质超速离心用于蛋白质的分离纯化及分子量的测定。 沉降系数（sedimentation coefficient,S) 指单位力场中的沉降速度（1S＝10-13秒）。 沉降系数与物质的分子量的大小、形状、密 度及溶剂的密度高低有关。分子量越大，颗粒越 紧密，沉降系数越大。 三、蛋白质的变性作用 变性作用的概念 在某些物理或化学因素的作用下，蛋白质特定的空间构象被破坏，从而导致其理化性质改变和生物活性丧失，称为蛋白质的变性。 变性的实质 次级键断裂，空间结构破坏 引起变性的因素 物理因素 高温、高压、紫外线、电离辐射、超声波等。 化学因素 强酸、强碱、有机溶剂、尿素、重金属盐等。 变性蛋白质的特点 A.生物学活性丧失 B.溶解度降低，易于沉淀 C.粘度增加 D.结晶能力消失 E.易被蛋白酶水解 蛋白质变性的应用 用75%乙醇、高温、高压和紫外线等消毒杀菌； 临床化验室常用钨酸、三氯乙酸沉淀蛋白质制备无蛋白血滤液， 采用热凝法检查尿蛋白； 低温保存激素、酶、疫苗和免疫血清等蛋白质生物制剂。 牛核糖核酸酶的变性与复性 蛋白质沉淀 概念 蛋白质从溶液中析出的现象称为沉淀。 方法 盐析法、有机溶剂的沉淀、重金属盐沉淀、生物碱试剂沉淀。 变性的蛋白质易于沉淀，但不一定都发生沉淀。沉淀的蛋白质易发生变性，但并不都变性，如盐析。 蛋白质的凝固 加热使蛋白质变性并凝聚成块状称为凝固。 此凝块不溶于强酸或强碱中。凝固实际上是蛋白 质变性后进一步发展的不可逆的结果。因此，凡 凝固的蛋白质一定发生变性。 四、蛋白质的紫外吸收与呈色反应 （一）蛋白质的紫外吸收 蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸残基，具有紫外吸收能力，在280nm处有最大吸收峰。此特性常用于蛋白质含量的测定。 （二）蛋白质的呈色反应 1.双缩脲反应： 凡分子中含有两个或两个以上氨基甲酰基（-CONH2）的化合物都能与碱性铜溶液作用，形成紫红色的复合物，这一反应称为双缩脲反应。 临床化学检验中常用双缩脲法来测定血清总蛋白、血浆纤维蛋白原的含量。 2.酚试剂反应 蛋白质分子中的酪氨酸残基在碱性铜试剂存在下，与酚试剂（磷钨酸和磷钼酸）反应生成蓝色化合物。 临床上常用酚试剂反应来测定血清粘蛋白、脑脊液中的蛋白质等微量蛋白质的含量。