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菌落总数的检测与结果的出具 杨淑霞 菌落总数的定义 食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。 2 冰箱：2 ℃～5 ℃。 3 恒温水浴箱：46 ±1 ℃℃。 4 天平：感量为0.1 g。 5 均质器。 6 振荡器。 7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头。 8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。 9 无菌培养皿：直径90 mm。 10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。 11 放大镜或/和菌落计数器。 培养基和试剂 平板计数琼脂（plate count agar，PCA）培养基 1 成分 胰蛋白胨 5.0 g 酵母浸膏 2.5 g 葡萄糖 1.0 g 琼 脂 15.0 g 蒸馏水 1000 mL pH 7.0±0.2 2 制法 将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装试管或锥形瓶， 121 ℃高压灭菌15 min。 检验程序 操作步骤 1 样品的稀释 固体和半固体样品：称取25 g样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10的样品匀液。 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。 操作步骤 2、培养 待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ±1 ℃℃培养48 h±2 h。水产品30 ±1 ℃℃培养72 h±3 h。 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL），凝固后翻转平板，按上述条件进行培养。 操作步骤 3、菌落计数 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。 选取菌落数在30 CFU～300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU的平板记录具体菌落数，大于300 CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以代表一个平板菌落数。 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。 菌落总数的报告 1 菌落数小于100 CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。 2 菌落数大于或等于100 CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。 3 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。 4 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。 5 称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告 * 模板来自于 * 目 录 1 2 3 4 5 6 菌落总数的定义 设备和材料 培养基和试剂 检验程序 操作步骤 菌落总数的计算与报告 2 磷酸盐缓冲液： 成分 磷酸二氢钾（KH2PO4） 34.0g、蒸馏水500mL 、 pH 7.2 制法 贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175 mL的1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1000 mL后贮存于冰箱。 稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000 mL，分装于适宜容器中，121 ℃高压灭菌15 min。 3 无菌生理盐水 成分 氯化钠8.5g 、蒸馏水1000 mL 制法 称取8.5ｇ氯化钠溶于1 000 mL蒸馏水中，121 ℃高压灭菌15 min。 用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。 按上述操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1