《生物化学》第三章酶化学课稿.ppt

＋ 羧肽酶催化中的电子云形变 C＋=O－ 靠近 电子云形变 定向 极性专一性契合区 H2+N＝C 精氨酸 C端确认区 注意 ＋ 羧肽酶A 的催化机理 2、胰凝乳蛋白酶的催化机理 底物：选择性降解带芳香环侧链的氨基酸和大的疏水侧链的氨基酸 活性中心的必需氨基酸：Ser195、His57、Asp102 催化机制：一般的酸碱催化和共价催化 3、烯醇化酶 ——作用需要金属离子 2-磷酸甘油酸 磷酸烯醇丙酮酸 烯醇化酶 碱催化 稳定中间产物 酸催化 四. 酶活性的别构调节 1、别构调节和别构酶 别构调节：酶分子的非催化部位与某些化合物可逆地非共价结合后发生构象的改变，进而改变酶活性状态。 别构酶：具有别构现象的酶。 别构剂：能使酶分子发生别构作用的物质。 活性中心 调节中心 2、协同效应 （1）概念：当别构酶的一个亚基与其配体（底物或别构剂）结合后，能够通过改变相邻亚基的构象而使其对配体的亲和力发生改变，这种效应就称为别构酶的协同效应。 如果对相邻亚基的影响是导致其对配体的亲和力增加，则称为正协同效应；反之，则称为负协同效应。 如果是同种配体所产生的影响，则称为同促协同效应。如果是不同配体之间产生的影响则称为异促协同效应。 （2）类型 活性中心AA残基一级结构可能相距很远，通过肽链折叠空间构象上靠近 溶菌酶 2、维持活性所必需的氨基酸残基 酶的必需基团： 概念：与酶的催化活性直接相关的化学基团，若经化学修饰则酶的活性丧失。 类型：His的咪唑基、Ser的-OH、Glu的侧链-COOH、Cys的-SH. 小结：活性部位与必需基团的关系 必需基团 活性部位 维持酶的空间结构 结合部位 催化部位 专一性 催化性质 3、活性中心存在的实验证明（了解） 切除法 化学修饰法 亲和标记法 X-射线衍射技术 化学修饰法 原理：用某些化学试剂与酶分子侧链基团以共价键结合，观察酶的活性改变，以确定活性中心的氨基酸残基。 如果共价修饰后酶活性不受影响，则修饰的氨基酸残基不是活性中心内； 如果酶活性丧失或降低，则修饰的氨基酸残基可能位于活性中心内。 举例： 胰凝乳蛋白酶的活性中心的确定 丝氨酸蛋白酶 DFP 二异丙基氟磷酸 亲和标记法 原理：根据E与S能特异性结合的性质，设计合成一种含有反应基团的S类似物，可与S一样进入E的活性中心，通过共价结合而使酶失去活性. + X-Y 3－9 胰凝乳蛋白质酶的亲和标记法测定活性中心 S 对甲苯磺酰－ L-苯丙氨酸氯甲酮 X-射线衍射技术 二. 酶促反应机制 基元催化的分子机制 酶具有高催化能力的原因 酸碱催化 共价催化 金属离子催化 邻近和定向效应 诱导契合和底物形变 电荷极化和多元催化 疏水的微环境的影响 （一）基元催化的分子机制（了解） 1. 基元催化的概念 ---由某些基团或小分子催化反应的，包括酸碱催化、共价催化和金属离子催化。 亲电催化剂----缺电子的原子或基团，倾向于从S 的多电子基团接纳电子。 亲核催化剂----具有未共享电子对的基团，倾向于向S的缺电子的核提供电子。 2. 酸碱催化 通过暂时性地向S提供H+或从S接纳H+以稳定过渡态的一种催化机制。 特殊的酸碱催化-------OH-与H+的反应 一般或广义的酸碱催化 为Tyr 248 为Arg 145 为Glu 270 为底物 Zn 羧肽酶活性中心示意图 3. 共价催化 亲电基团------Mg 2+、 Mn 2+ （有空轨道） 亲核基团------ ——酶活性中心亲电/亲核基团参与S敏感键断裂的机制。 ¨ -OH ¨ -SH (有孤对电子) 4、金属离子催化 （1） 金属酶 (metalloenzyme) 含紧密结合的金属离子（常为活性中心的组成部分） （2）金属激活酶( metal-activited enzyme) 含松散结合的金属离子 1) 金属离子作为辅助因子的酶的分类 羧肽酶 Zn2+ 2）金属离子催化作用的机制 ? 提高水的亲核性能 ? 电荷屏蔽作用 ? 电子传递中间体 （二）酶具有高催化能力的原因 1、 邻近与定向效应 2、 诱导契合与底物形变 3、 电荷极化和多元催化 4、 疏水的微环境的影响 1、 邻近与定向效应 靠近 电性吸引、疏水作用 定向 底物 酶 一个分子间的反应变成了一个类似分子内的反应 2、 诱导契合与底物形变 诱导 互补性结构变化 契合 活性中心催化基团进行催化 能否契合— 专一性的由来 + - + - 稳定的底物 通过电荷等相互作用，底物张力变形激活形成过渡态 张力与形变 - - + + 3、 电荷极化和多元催化 胰凝乳蛋白酶分子中催化三联体构象 His57 Asp102 Ser