菟丝子总黄酮对氢化可的松致大鼠少弱精子症的治疗实践.docVIP

菟丝子总黄酮对氢化可的松致大鼠少弱精子症的治疗实践 　　及其机制少弱精子症是指连续测定3 次精液，精子的密度lt; 20 times; 109·L - 1、活动力lt; IIdeg;、活动率lt; 50%、正常形态精子lt; 60% 的病症，为男性不育症中常见的疾病。中国育龄夫妇中不孕患者占10%，男性不育患者约占40%，而且有逐年增多的趋势。下丘脑- 垂体- 靶腺轴( 肾上腺轴、性腺轴) 的紊乱是肾阳虚的主要病理环节。给予动物大剂量的氢化可的松是建立肾阳虚少弱精子症模型的经典方法。旋花科植物菟丝子的干燥成熟种子中含有黄酮、多糖、甾醇、微量元素等成分，其中主要的药效成分是黄酮类化合物。菟丝子中的黄酮能温补肾阳，在治疗性腺功能退化、睾丸病变、精子质量不高等方面的疗效显著，但其药理机制尚未见相关报道。现应用菟丝子总黄酮( TFSC) 治疗由氢化可的松导致的少弱精子症，研究其对少弱精子症的疗效，并从氧化应激和凋亡基因两个方面探讨TFSC 的药理机制。 　　1 实验部分 　　1. 1 仪器、试药与动物 　　Biomate 3S 紫外分光光度计( Thermo Fisher Scientif公司) ; 5424R 低温冷冻离心机( Eppendorf 公司) ; AB Sciex 4000 Q 质谱仪( TRAP 公司) ; LC -20A 高效液相色谱( 日本岛津) 。氢化可的松注射液( 山西芮城县同仁兽药有限公司，批号: 130601) ;菟丝子提取物、菟丝子总黄酮( TFSC，西安开来生物工程有限公司，含量20%) ; 睾酮( T) 、睾酮- d3 对照品( 美国Cerilliant) ; 葡萄糖醛酸糖苷酶( 美国Sigma); 考马斯亮蓝蛋白、酸性磷酸酯酶( ACP) 及乳酸脱氢酶( LDH) 、琥珀酸脱氢酶( SDH) 、丙二醛( MDA) 、谷胱甘肽( GSH) 、总超氧化物歧化酶( T -SOD) 测定试剂盒( 南京建成生物工程有限公司) ;TRlzol( Invitrogen 公司) ; Fas、Fasl 引物[生工生物工程( 上海) 股份有限公司]; PrimeScript RT MasterMix、SYBR Premix Ex Taq 试剂盒( TaKaRa 公司) ; 其余试剂为分析纯。39 只SPF 级成年♂Wistar 大鼠[扬州大学比较医学中心，动物许可证号: SCXK( 苏) 2012 - 0004]，体重200 ～ 220 g，大鼠均自由进食、饮水，饲养过程中每天换水、隔日换1 次笼中的木屑垫料，环境温度20 ～ 25 ℃、白天光照12 h /夜晚12 h。 　　1. 2 方法与结果 　　1. 2. 1 大鼠的分组与给药将39 只♂Wisatr 大鼠适应性喂养7 d，随机均分成空白对照组、模型组和TFSC 组。其中，实验前10 d 每天ip 给予模型组和TFSC 组大鼠5 mg·mL - 1氢化可的松( 给药容积为5mL·kg - 1 ) ，每天ip 给予空白对照组同等体积的生理盐水。第11 天，从各组中分别随机选取3 只大鼠，处死后分别检测脏器指数、生化指标，并采集附睾精子检测数量及活动率。与空白对照组比较，氢化可的松组大鼠的附睾指数无显著性差异，体重、睾丸指数显著降低( P lt; 0. 05) ，肾脏指数显著增大( P lt;0. 05) ，精子数量显著减少( P lt; 0. 05) ，精子活动率显著降低( P lt; 0. 01) ( 表1) ; 血清中睾酮的含量显著降低( P lt; 0. 01) ，睾丸内ACP、LDH、SDH 水平均有不同程度的下降( P lt; 0. 01) ( 表2) 。结果表明:氢化可的松所致大鼠少弱精子症造模成功。然后，对剩余各组大鼠( n = 10) 继续进行后续实验，其中，每天ig 给予TFSC 组20 mg·mL - 1TFSC( 给药容积为5 mL·kg - 1 ) ，每天ig 给予模型组和空白对照组同体积的蒸馏水，连续15 d。每天观察各组大鼠的一般情况并根据体重调节给药量。造模过程中，第26 天时，注射氢化可的松大鼠逐渐出现体重下降、畏寒喜暖、活动减少、精神萎靡、体毛疏松、反应迟钝、蜷缩弓背、多尿、泄泻等肾阳虚症状。经菟丝子总黄酮治疗15 d 后，肾阳虚症状有很大程度的改善。 　　1. 2. 2 脏器指数、附睾精子数量及活动率的检测实验第26 天，称重大鼠后取股动脉血，分离血清，置- 70 ℃冻存。处死大鼠后，立即取出双侧肾脏、睾丸及附睾，迅速称重，记录湿重，计算脏器指数。结果表明: 各组间的附睾指数无显著性差异( 表3) 。与空白对照组比较，模型组中大鼠的体重( P lt;0. 01) 、睾丸指数显著性减小( P lt; 0