生物化学第三章核酸研究报告.ppt

限制性内切酶（restriction endonuclease） 简称限制酶 ： 限制性内切酶主要降解外源的未经特殊修饰的DNA，对自身起了保护作用。 限制性内切酶的特征 ① 具有严格的碱基专一性，有专一的识别顺序、切点 ② 粘性未端，平整末端 DNA分子中核苷酸的排列顺序： 酶法（双脱氧法、末端终止法） 基因和基因组 基因即一段有功能的DNA片段，生物细胞中DNA分子的最小功能单位（交换单位）。 一个细胞或生物体所含的全套基因称基因组； 基因组计划： 人类基因组计划（Human Genome Project， HGP ） 酵母基因组计划 （YGP） 大肠杆菌（E.Coli） 真核生物基因组的特点 A. 重复序列 单拷贝序列：在整个DNA中只出现一次或少数几次，主要为编码蛋白质的结构基因。 中度重复序列：在DNA中可重复几十次到几 千次。 高度重复序列：可重复几百万次 高度重复序列一般富含A-T或G-C，富含A-T的在密度梯度离心时在离心管中形成的区带比主体DNA更靠近管口；富含G-C的更靠近管底，称为卫星DNA（satellite DNA） 富含A-T 富含G-C 主体DNA B. 有断裂基因 mRNA 1 872bp 内含子（intron)：基因中不为多肽编码，不在mRNA中出现。 A B C D E G 7 700bp F 外显子（exons）：为多肽编码的基因片段。 ：由于基因中内含子的存在。 transcription 原核生物基因组的特点 A. DNA大部分为结构基因，每个基因出现频 率低。 B. 功能相关基因串联在一起，并转录在同一mRNA中（多顺反子）。 C.有基因重叠现象。 A B C D E F G 五、 RNA的分子结构 1 RNA的一级结构 2 tRNA 的分子结构 3 rRNA的分子结构 4 mRNA的分子结构 RNA分子中各核苷之间的连接方式（3′-5′磷酸二酯键）和排列顺序叫做RNA的一级结构 OH OH OH 5′ 3′ RNA与DNA的差异 DNA RNA 糖 脱氧核糖 核糖 碱基 AGCT AGCU 不含稀有碱基 含稀有碱基 1 RNA的一级结构 转运RNA,即tRNA，它的一端可以共价连接一个氨基酸，在蛋白质合成过程中起转运氨基酸的作用。 * tRNA的一级结构特点 含 10~20% 稀有碱基，如 DHU 3′末端为 — CCA-OH 5′末端大多数为G 具有 T?C tRNA 的结构 二级结构特征： 单链三叶草叶形 四臂四环 三级结构 特征： 在二级结构基础上进一步折叠扭曲形成倒L型 X光晶体衍射解出的 tRNA 立体结构 tRNA的三级结构 核糖体RNA即rRNA，是细胞内含量最多的RNA,约占RNA总量的80%以上，是蛋白质合成机器—核糖体的组成成分。 在rRNA分子中，研究最多的是5SrRNA和16SrRNA。大肠杆菌中的5SrRNA的5 ’-端常出现pppU，3 ’-端为UOH ；第43-47位的核苷酸顺序为CGAAC（真核细胞此序列则出现在5.8SrRNA），这是rRNA与tRNA相互识别、相互作用的部位；原核细胞16SrRNA的3 ’-端总存在序列ACCUCCU，这是mRNA的识别位点。 rRNA的分子结构 特征：? 单链，螺旋化程度较tRNA低 ? 与蛋白质组成核糖体后方能发挥其功能 5SRNA的二级结构 信使RNA即mRNA，为单链结构，约占RNA问题的5-10%，在合成时转录模板DNA所携带的遗传信息。 mRNA相对分子质量不均一，代谢活跃，这给一级结构的研究带来一定困难。真核细胞mRNA与原核mRNA比较，在结构上具有明显的区别。真核细胞mRNA的3 ’-末端有一段可长达200个左右的聚腺苷酸（poly A），称为“尾”结构；5 ’-末端有一个甲基化的鸟苷酸,称为“帽”结构，表示m7Gp5p5pXpmY，其中X、Y为任意碱基。这种“尾”和“帽”的结构在mRNA功能表现中具有重要作用。 mRNA的分子结构 原核生物mRNA特征： 先导区+翻译区（多顺反子）+末端序列 真核生物mRNA特征： “帽子”（m7G-5′ppp5′-N-3′p）+单顺反 子+“尾巴”（Poly A） 原核细胞mRNA的结构特点 5′ 3′ 顺反子 顺反子 顺反子 插入顺序 插入顺序 先导区 末端顺序 真核细胞mRNA的结构特点