养猪与猪病防治教学课件主讲于桂阳.ppt

实践教学 在血凝板上的第12排第1孔加稀释液70微升，第2——7孔各加稀释液50微升，取阳性血清10微升加入第1孔混匀，并从中取出50微升加入第2孔混匀后取出50微升加入第3孔……直到第7孔混匀后弃50微升，该孔的阳性血清稀释度为1：512。 4）在血凝板上的第1排第8孔加稀释液50微升，作为稀释液对照孔。 5）判定方法和标准：先观察阴性血清对照孔和稀释液对照孔，红血球应全部沉入孔底，无凝集现象（—）或呈（+）的轻度凝集为合格；阳性血清对照应呈（+++）凝集为合格。 在以上3孔对照合格的前提下，观察待检血清各孔的凝集程度，以呈“++”凝集的待检血清最大稀释度为其血凝效价（血凝价）。血清的血凝价达到1：16为免疫合格。 6）注意事项 ①勿用90°或130°血凝板，以免误判。 ②污染严重或溶血严重的血清样品不宜检测。 ③冻干血凝抗原，必须加稀释液浸泡7～10天，方可使用，否则易发生自凝现象。 ④用过的血凝板，应及时冲冼干净，勿用毛刷或其他硬物刷洗板孔，以免影响孔内光洁度。 ⑤使用血凝抗原时，必须充分摇匀，瓶底应无血球沉积。 ⑥液体血凝抗原4～8℃贮存有效期四个月，可直接使用。冻干血凝抗原4～8℃贮存有效期三年。 ⑦如来不及判定结果或静置2小时结果不清晰，也可放置第2天判定。 ⑧每次检测，只设阴性、阳性血清和稀释液对照各1孔。 ⑨稀释不同的试剂要素时，必须更换塑料咀。 ⑩血凝板和塑料咀洗净后，自然干燥，可重复使用。 2.2伪狂犬病乳胶凝集试验（LAT）操作方法（必做） 实验材料：伪狂犬病乳胶凝集抗原、伪狂犬病阳性血清、阴性血清、稀释液，玻片，溶液配制见附录E(标准的附录) 实训内容及操作步骤： 1）待检血清不须经热灭活或其它方式的灭活处理 2）将待检血清用稀释液作倍比稀释后，各取15μL与等量乳胶凝集抗原在洁净干燥的玻片上用竹签搅拌充分混合，在3—5分钟内观察结果；可能出现以下几种凝集结果，即： 100%凝集：混合液透亮，出现大的凝集块 75%凝集：混合液几乎透明，出现大的凝集块 50%凝集：约50%乳胶凝集，凝集颗粒较细 25%凝集；混合液浑浊，有少量凝集颗粒 0%凝集：混合液浑浊，无凝集颗粒出现 如出现50%凝集程度以上的（含50%凝集程度），判为伪狂犬病抗体阳性，否则判为抗体阴性。如为阴性，可用微量中和试验进一步检测。 五、实训报告 根据实际操作详细记录过程及结果和分析。 实训十八 猪伪狂犬病的诊断方法与防制 一、实训目的 通过实训，使学生掌握伪狂犬病的实验室诊断方法。 二、实训条件与用具 家兔、研钵、离心机、冰箱、注射器、生理盐水、甘油、青霉素、链霉素等；猪伪狂犬病ｇＧ鉴别诊断乳胶凝集试验（ＬＡＴ），需要猪伪狂犬病ｇＧ鉴别诊断乳胶凝集试验（ＬＡＴ）试剂盒。 三、实验方法与手段 采取发病猪的脑组织病料接种试验动物兔子观察注射部位是否剧痒，或采用猪伪狂犬病ｇＧ鉴别诊断乳胶凝集试验（ＬＡＴ）诊断。 四、实训内容 １.动物接种。将病料悬液的离心上清液接种于家兔的肋部和腹侧皮下。每只0.5ml，如果含有病毒，家兔在接种后48～72h后开始发病，食欲废绝，狂躁不安，体温升高（41℃），注射部位表现剧痒，频频回头撕咬接种部位，致使皮肤脱毛、溃烂、出血，数小时后四肢麻痹、卧地不起，最后衰竭，2～5d死亡。 ２.猪伪狂犬病gG鉴别诊断乳胶凝集试验（LAT）。 2．1材料准备：伪狂犬病毒gG蛋白致敏乳胶抗原、伪狂犬病毒致敏乳胶抗原、伪狂犬病毒阳性血清和注射gG基因缺失疫苗血清、玻片、吸头等。 2.2操作步骤 2.2.1对照试验???检测之前应做对照试验，出现如下结果试验方可成立，否则应重试，如重试仍不出现如下结果则停止使用：伪狂犬病毒阳性血清加gG蛋白致敏乳胶抗原呈阳性凝集；注射gG基因缺失疫苗血清加gG蛋白致敏乳胶抗原呈阴性凝集；伪狂犬病毒阳性血清与注射gG基因缺失疫苗血清加伪狂犬病毒致敏乳胶抗原均呈阳性凝集。 2.2.2检测试验 2.2.2.1待检血清不须经热灭活或其它方式的灭活处理 2.2.2.2待检血清一滴，置于玻片上。加gG蛋白致敏乳胶抗原一滴，用牙签混匀，搅拌并摇动1-2分钟，于3-5分钟内观察结果(注：gG蛋白致敏乳胶抗原与血清反应的凝集颗粒较细)；可能出现以下几种凝集结果，即： ????“++++”全部乳胶凝集，颗粒聚于液滴边缘，液体完全透明； ????“+++”大部分乳胶凝集，颗粒明显，液体稍混浊； ????“++”约一半乳胶凝集，但颗粒较细，液体较混浊； ????“+”有少许凝集，液体呈混浊； ????“—”液滴呈原有的均匀乳状。 以出现“++”以上凝集者判为阳性凝集。 2.3注意事项 第一，贮藏。在2～8℃冷暗处保存，暂定半年。 第二，乳胶抗原。为乳白色状液，如出现分层，使用前轻轻