绵羊卵母细胞论文.docVIP

绵羊卵母细胞体外成熟培养条件的研究 蔡丽娟，于昊赢，孙晓冬，尹多，李钟淑* （延边大学农学院 动物科学系，吉林 延吉 133000） 摘要:本实验比较了不同绵羊卵母细胞的收集方法、不同培养时间、FSH和LH不同添加量对绵羊卵母细胞的体外成熟的影响，结果显示：应用切割法比抽吸法更适合于绵羊卵母细胞的回收（2.44：1.65）；绵羊卵母细胞的成熟培养适宜时间为22-24h，培养26-28h时出现了轻微的过成熟现象;FSH/LH浓度为10ug/ml时更有利于卵母细胞的成熟，以此为延边奶山羊与绵羊构建异种间克隆胚胎提供基础数据。 关键词：绵羊；卵母细胞；体外成熟 The Study of Maturation in Vitro Culture Conditions of Sheep Oocytes Cai Li-juan, Yu Hao-ying, Sun Xiao-dong, Yin Duo, Li Zhong-shu* (Department of Animal Science, Agricultural College of Yanbian University, Yanji 133000，China) Abstract：The experiment comparison the effects of different sheep oocyte collection method, different culture time, different dosage of FSH and LH on sheep oocyte in vitro maturation , the results showed that: the application of cutting method is more suitable than the suction method for sheep oocyte recovery ( 2.44: 1.65); The suitable training time of ovine oocytes maturation culture is 22-24h, 26-28h appeared slight over mature phenomenon; FSH / LH concentration of 10ug / ml is more beneficial to the maturation of oocytes. This study provided the basic data of constructing the interspecies cloned embryos of Yanbian dairy goats and sheep Key words: sheep; oocytes; in vitro maturation 二十世纪以来，克隆技术的发展是大家有目共睹的，哺乳动物异种间克隆也越来越受到人们的关注，它对物种的改良、濒危动物的保护等具有十分重要的意义，但是目前异种动物克隆技术的成功率仍然很低，试验中仍有很多环节需要进一步改进和完善。与同种动物（如，羊-羊）相比，异种动物（如，山羊-绵羊）克隆研究进行的较少，体系也是很不完善。延边奶山羊是优良的地方品种，体型大、耐粗饲、适应性强、产奶量高、终年以放牧饲养为主，很适合在延边朝鲜族自治州特殊的地理环境下饲养，是洲内人民的主要经济来源之一。但是由于长期以来没有系统的管理制度，选育不当，导致延边奶山羊体型外貌不一、体格不大、体重变轻、产奶性能高低差异显著，泌乳期较短，经济收益不大[1]。为改善这一现状，优化种群，试验将利用克隆技术进行品种改良，但是由于延边奶山羊屠宰量少，且屠宰地点分散，导致卵母细胞不易获得，试验很难进行。但是绵羊的卵母细胞很容易获得，因此试验利用绵羊卵母细胞进行延边奶山羊-绵羊异种间核移植，该技术的应用使试验顺利进行。本文主要介绍优化绵羊卵母细胞体外成熟的培养条件，应用正确的卵巢收集方法，在适宜的培养时间和适宜的激素浓度下，获得最优质的受体细胞，为延边奶山羊与绵羊卵母细胞体外成熟、异种间核移植和胚胎体外培养等研究提供基础数据。 一、材料和方法 1、实验材料 绵羊卵巢（取自龙井市屠宰场） 2、主要的药品及实验仪器设备 2.1 主要药品 TCM-199、胎牛血清（FBS，杭州四季青）、17β-雌二醇、丙酮酸钠、促卵泡激素(FSH)、 促黄体激素(LH)、DMEM粉末、青霉素、链霉素等，试剂及无机盐无特殊说明均为Sigma 公司产品。所有药品均在生物超净工作台内配制，除生理盐水用水为三重蒸馏水，其余 药品所用水均为去离子水。所有药品均用孔径为25μm的微孔过滤器过滤。 ⑴ 采 卵 液：TCM-199、15mmol/L