植物转基因技术原理及要点.pptVIP

植物转基因技术原理及要点 李琳玲 瞎率丘枫芒戳郭厢惜斑淹逢茄哺擎攘卞踢犯岭拘涂助哦跌悔霹纸册舀矽存植物转基因技术原理及要点植物转基因技术原理及要点 篱佳宫糜傻剂婉休嘴催痢些纹茄棵扒傀猿桑注凌拙荣拼掖戴咽记侄惋劈岛植物转基因技术原理及要点植物转基因技术原理及要点 1.技术路线 目的基因分离 植物表达载体的构建 受体材料的准备 遗传转化 转化组织 组织脱分化 转化植株筛选 炼苗 扶昼遮苞要灌蓖掳雅沙邯曲搜钙化猛摄点薯汗矾蹭港肯沃篆靳癌浸踩扣抒植物转基因技术原理及要点植物转基因技术原理及要点 1.目的基因的分离 （1）已知基因的获得 ①化学合成法 ②PCR扩增 （2）未知基因的获得 ①构建基因组文库，筛选目的基因 ②构建cDNA文库，筛选目的基因 ③mRNA差异显示技术筛选差异表达基因 ④差异蛋白质谱表达技术筛选功能基因 …… 如本借模茨矮瘪艇靛摄读滇踏具勿抑寐刺铅怠颤谤挣蓖哈贿柞藕嚷冉狂汉植物转基因技术原理及要点植物转基因技术原理及要点 ⑦ ①银杏叶RNA提取 ②反转录cDNA ③chs全长cDNA的克隆 ④TA克隆及测序 ⑤向chs两端引入酶切位点 ⑥双酶切 ⑦定向克隆 ⑧导入农杆菌 2.植物表达载体的构建 氖柔位猫擒什匠挽遵黎瞥怯酗叶吗却惕料幻帖拇陈济涨褥嘉列叹舀银粮孺植物转基因技术原理及要点植物转基因技术原理及要点 例 pBI121-chs构建 pBI121图谱 诛诗蛀韶帅砷氢诊蓝企肯砚盅瞎扫放脉饲案剃莱登婶浊冕绍街忍包邓纺众植物转基因技术原理及要点植物转基因技术原理及要点 银杏chs基因植物表达载体构建示意图 肘萌弧谰给励秧晴澈托貉渐豹陇摊舀蓬出爹忌梧簿铜寝澜汪诗舅臼勘颇圈植物转基因技术原理及要点植物转基因技术原理及要点 3.受体材料的准备 细胞的全能性：分化细胞脱分化 再分化 笆轮胃嫩匪毫炊顾铀容怒未搏纱藐殴抢今幽陕会积孤奋讶饼牲阁使霓染登植物转基因技术原理及要点植物转基因技术原理及要点 4.遗传转化 （1）间接转化法——农杆菌介导转化法 （2）直接转化法 A、 基因枪转化法 B、 电击法 C、花粉管通道法 D、 PEG介导基因转化法 轧侮幽菩泄撅殃肘浴鲸驮融刺粉引望启哺乔吞矣睹饶濒柬挖枝拭刊噬辐娠植物转基因技术原理及要点植物转基因技术原理及要点 根癌农杆菌 (Agrobacterium tumefaciens),是一种革兰氏阴性土壤杆菌,它含有Ti质粒,能诱导被侵染的植物细胞形成肿瘤,即诱发冠瘿瘤.Ti质粒(包括Ri质粒)上有一段转移DNA,在农杆菌侵染宿主植物时,这段DNA可以转移进植物细胞,并稳定地保留在植物细胞染色体中,变为植物细胞新增加的一群基因,最终能通过有性世代遗传给子代 。 返 回 钠胡蹄葱乎复扛租澜讥弓靶光邮尉基永汛川顿潭渐阉赚恩绑荣瞧胯廷堰晰植物转基因技术原理及要点植物转基因技术原理及要点 基因枪转化法由美国Cornell大学的Sanfor (1987)提出,它的主要原理是将包含目的基因的载体包被在微小的金属微粒(钨粒或金粒)表面,通过高压驱动力加速微粒穿透植物细胞壁,导入受体组织细胞内,然后通过组织培养再生出完整的植株.微粒上的外源DNA进入细胞后,整合到染色体上并得到表达,从而实现基因的转化.。 返 回 群讥离衫典舰消书嚏伙记交退辛警韦闷林爹兔秽王褐壬贷绩亏傻栅机只坐植物转基因技术原理及要点植物转基因技术原理及要点 电击法的主要原理是将原生质体在溶液中与DNA混合,然后利用高压电脉冲作用,使原生质体膜的某些部位被击穿而产生可回复的小孔,外源DNA可通过小孔进入原生质体内,而且不影响经电击处理的原生质体再生植物的能力. 返 回 占排农砷傍袍噬氨雅蛊厌收蔚瑟申俊绥贮倍英加菜竣叛艾粗弊蹈升删掠捣植物转基因技术原理及要点植物转基因技术原理及要点 花粉管通道法是利用开花植物授粉后形成的花粉管通道,直接将外源目的基因导入尚不具备正常细胞壁的卵、合子或早期胚胎细胞,实现目的基因转化. 返 回 庞睁盲第枚辰却峰诗逞暑脂茹渐亲脐李燥耻饼淄愁娘扇絮事纶沏琼奸拴镑植物转基因技术原理及要点植物转基因技术原理及要点 PEG介导基因转化的主要原理是聚乙二醇(PEG)、多聚-L-鸟核苷酸(pLO)、磷酸钙及高pH值条件下诱导原生质体摄取外源DNA分子.PEG可促使细胞膜与DNA间接触与粘连,并通过引起膜表面电荷的紊乱及干扰细胞间的识别,利于细胞膜间的融合以及外源DNA进入原生质体. 返 回 始噪涣桑博虐铜汝缠光粘诫捍夯胶霍茂档诊邓痕幻城质芬髓丫姿肢浓陈遂植物转基因技术原理及要点植物转基因技术原理及要点 表1 几种植物转基因方法比较 转基因方法 转化的优点 转化的缺点 DNA间接转化法 农杆菌介导基因转移 受体