实验十 戊型肝炎病毒lgG 抗体测定.pptVIP

实验十 戊型肝炎病毒lgG 抗体测定 一、实验原理： 微孔条上包被的基因重组HEV抗原，可与样品中抗HEV抗体反应，加入HRP标记的抗人lgG抗体后，将形成“包被抗原－抗体－酶标二抗”复合物。加入显色剂，复合物上连接的HRP使显色剂生成蓝色产物，终止后变为黄色。从而判断样品中HEV－lgG抗体的存在与否。 二、操作步骤： 1、配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。 2、编号: 将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3 孔、阳性对照2孔、空白对照1孔。 3、稀释：每孔加入100微升样品稀释液。 4、加样：每孔加入待测样品或阴、阳性对照各10微升（空白对照孔除外），轻轻振荡混匀。 5、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 6、洗涤：小心揭掉封板膜，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干。 二、操作步骤： 7、加酶：每孔加入酶标试剂100微升，空白孔除外。 8、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 9、洗涤：小心揭掉封板膜，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干。 10、显色：每孔加入显色剂A、B液各50微升，混匀，37℃避光显色15分钟。 11、测定：每孔加终止液50微升，混匀，10分钟内测定结果。 三、结果判定： 在白色背景下观察各孔显色情况，有明显黄色者为HEV－lgG抗体反映阳性；无色者为HEV－lgG抗体反映阴性。