实验六、大肠杆菌质粒DNA的提取与电泳检测.pptVIP

实验六 大肠杆菌质粒DNA的提取及检测 基础性实验 实验目的 掌握碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA的原理和方法。 掌握离心机、移液器、震荡培养箱的正确使用方法。 了解不同构型的质粒DNA在琼脂糖凝胶中泳动速率的差异。 实验原理 质粒是存在于细菌染色体外的能够自主复制的环状DNA分子。大小在1~200kb之间，质粒DNA通常以游离状态持续稳定地处于染色体外（在一定的条件下又会可逆地整合到寄主染色体上），随着染色体的复制而复制，并通过细胞分裂传递到后代。由于质粒DNA自身具有复制原点、可携带外源基因、转移性强、拷贝数高、带有选择性标记等特点，使得质粒成为基因工程中最常用的DNA载体。 实验原理 质粒DNA分子具有3种不同的构型： SC构型：共价闭合环形DNA（cccDNA），质粒的两条多核苷酸链均保持着完整的环形结构； OC构型：开环DNA（ocDNA），质粒的两条多核苷酸链中一条保持着完整的环形结构，另一条链存在一处至多处断裂； L构型：线性DNA（linear DNA），质粒DNA发生双链断裂而形成线性分子。 实验原理 同一质粒DNA的不同构型尽管相对分子质量相同，但在琼脂糖凝胶电泳中的电泳迁移率却是不同的。一般情况下，泳动速率由快至慢依次为：超螺旋质粒（SC）、线性质粒（L）、开环质粒（OC）。 质粒DNA的提取方法较多，要根据宿主