《细胞与免疫学技术与原理》3讲解.ppt

第三节 体外受精技术 第四节 细胞转基因技术 细胞转基因技术 是指人类按照自己的意愿有目的,有计划,有根据,有预见地将外源基因导入生物细胞内,通过与染色体基因组进行稳定的整合,将生物性状遗传给后代的技术。 植物转基因 植物转基因是把目的基因与适当的载体相连接形成重组体DNA分子,并将它导入到寄主细胞中进行增殖与表达。 植物转基因的主要步骤 1、目的基因的获得 2、目的基因与载体连接 3、重组体DNA分子导入宿主细胞 4、目的基因在宿主细胞中的复制与表达 植物细胞转基因技术的应用 1、抗病虫害转基因植物 2、抗逆转基因植物 (耐盐,抗冻,抗旱等) 3、抗杂草转基因植物 4、转基因花卉植物 5、转基因植物食品 6、药用转基因植物(已用于生产各种疫苗,生长因子,生长激素等) 转基因技术目前在植物品种改良方面应用的主要领域有： （1）抗虫基因工程 （2）抗除草剂基因工程 （3）抗病基因工程 （4）抗逆基因工程 （5）延熟保鲜基因工程 （6）品质改良基因工程 （7）杂种优势利用基因工程。 目前国内外已经得到60种以上转基因植物，其中玉米、大豆、油菜、马铃薯、番茄和棉花等，已经大面积种植。 但国际上爆发了关于转基因植物对人体和环境是否安全的争论。 食用转基因植物是否会长肿瘤？ 你是支持转基因还是反对转基因？理由是什么？ 我国农业部批准商品化生产的转基因植物共有六种，包括两种抗棉铃虫的棉花，一种耐储存的番茄，一种抗黄瓜花叶病毒的番茄，一种甜椒，和一种转花色的矮牵牛。 转基因动物 指用人工方法将外源基因导入动物受精卵或早期胚胎细胞,使外源基因与动物本身的基因组整合,并随细胞的分裂而增殖,从而将外源基因稳定的遗传给下一代的工程化动物。 动物细胞转基因技术的应用 动物细胞转基因技术在生物学基础研究、医学、农业及生物工程等领域的应用，已取得相当的成果。 1．研究基因的结构和功能及其表达与调控 2．建立人类疾病动物模型，研究人类疾病基因治疗 传统的药物筛选方法是进行动物实验和体内实验，而传统的动物模型一般选取与人类某种疾病有类似症状的动物，其致病机理常与人体不完全一致，导致筛选结果与临床结果不一致。 利用转基因技术可建立敏感动物品系和产生与人类相同疾病的动物模型来进行药物筛选，大大提高了准确性，缩短了试验时间，降低成本。 凝胶珠悬浮于聚赖氨酸溶液中， 使之形成膜； 微滴加到CaCl2溶液中形成凝胶珠 凝胶珠用生理盐水洗去残留的CaCl2 生理盐水洗涤 得到动物细胞微囊 凝胶珠加0.05mol/L柠檬酸溶液处理 使半透膜的ALG成液态 生理盐水洗涤 悬浮于培养基中培养 微囊半透膜的孔径决定因素： 主要由聚赖氨酸的分子量决定，一般来说用高分子量的聚赖氨酸（PLL）覆膜孔径大，PLL分子量低则孔径小，通常使用40000～80000分子量的PLL。 PLL溶液的浓度及处理时间、溶液的pH值及使用温度也会影响膜的孔径。 微囊机械性能影响因素： 海藻酸的纯度高、粘度高容易成囊； 甘露糖醛酸和古罗糖醛酸的比例会影响微囊的形成及机械性能。 含古罗糖醛酸多的海藻酸容易成囊，机械性能好，不易破碎。 微囊化动物细胞的应用 1、生产药物 （1）单克隆抗体的生产 微囊化哺乳动物细胞的主要应用是单克隆抗体的生产。微囊工艺已生产以克计的单克隆抗体。微囊膜的孔径可以控制在能截留10万以上分子量的蛋白质的水平上，能截留单克隆抗体在微囊中。 悬浮培养与微囊培养比较 培养 方法 抗体mg/L 培养 天数 生产lg抗体所需的发酵体积 生产lg抗体所需的培养基体积 微囊 培养 2135 29 2.29 22.4 悬浮 培养 131 8 9.35 9.5 优点： 微囊系统更有利于单克隆抗体的生产，而且单克隆抗体截留在微囊中，培养获得的产物浓度和纯度均更高。 培养基中血清尤其是那些γ-蛋白能被半透膜排阻在微囊外，使纯化更简单。 （2）高值生化药物的生产 高表达有工业价值的蛋白质的重组细胞更多的用微囊化培养。 例： 一种在黑色素瘤细胞中表达的分子量为65000的重组蛋白用微囊化培养，纯化更简便。 （3）干扰素的生产 通过试剂和病毒方法诱导微囊化FS-1和Namalwa细胞生产干扰素。 这两种细胞在微囊中生产比悬浮单层培养或单层培养旺盛 2、在治疗及药物筛选上的应用 （1）人工器官 微囊化动物细胞在排除免疫反应上可能有普遍的意义。人们已将某些器官的细胞微囊化并植入体内以期望能代替这些器官的功能。