第1节DNA重组技术的基本工具.pptVIP

选修3：现代生物科技专题 基因工程 细胞工程 胚胎工程 生态工程 生物技术安全性和伦理 基因工程的产品 基因是可分的 基因：具有遗传效应的DNA片段，是决定生物性状的基本单位。 基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 基因转移载体的发现 工具酶的发明 DNA合成和测序技术的发明 DNA体外重组的实现 重组DNA表达实验的成功 第一例转基因动物问世 PCR技术的发明 1.1 DNA重组技术的基本工具 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” DNA连接酶——“分子缝合针” 基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 黏性末端和平末端 不同的限制酶切割后可以形成不同的黏性末端 有关限制酶的几个问题 主要是从哪类生物的细胞中分离纯化出来的？为什么这些生物中存在限制酶？ 主要存在于原核生物的细胞中。 原核生物经常受到外源DNA的入侵，是一种防御机制。 为什么限制性内切酶不切自己的DNA呢？ 细菌如果含有某种限制酶，其DNA分子中就不具备这种限制酶识别切割的序列。 限制性核酸内切酶的化学本质是什么？ 蛋白质 目前已经分离出多少种酶？ 从300种不同的微生物中分离出约4000种 限制酶在原核生物中有什么作用? 原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。 二、DNA连接酶——“分子缝合针” DNA连接酶有两种： E·coli连接酶：只能连接黏性末端； T4连接酶：既可“缝合”黏性末端，又可“缝合”平末端。 三、基因进入受体细胞的的载体— —“分子运输车” 三、基因的载体——“分子运输车” * 抗虫害的玉米 转鱼抗寒基因的番茄 转黄瓜抗青枯病基因的甜椒 乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷) 转基因鲑鱼 S 苏云金杆菌 C 伴胞晶体 专题1 基因工程 调节基因 无翻译产物基因 结构基因 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因拼接技术或DNA重组技术 基因工程的别名 生物体外 基因 DNA分子水平 剪切→拼接→导入→表达 人类需要的基因产物 例如：基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 证明DNA是生物的遗传物质 DNA结构的确定 DNA复制、转录、翻译过程的发现（中心法则的确立） 遗传密码的破译 体外DNA重组和转基因得以实现的理论基础是什么呢？ DNA是所有细胞生物的遗传物质 所有生物的DNA的结构基本相同，复制、转录、翻译的过程相同。 各种生物共用一套遗传密码 体外DNA重组和转基因得以实现的技术基础是什么呢？ 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ 基因工程培育抗虫棉的关键步骤： 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二： 抗虫基因与运载体DNA连接 关键步骤三： 抗虫基因导入受体(棉花)细胞 简称：限制酶 分布：主要在原核生物中 作用：识别双链DNA分子特定核苷酸序列，切割特定的位点的磷酸二酯键。 举例：EcoRI限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开 A A T T G C C T T A A G C T T A A G G A A T T C C T T A A G G A A T T C 目的基因 限制性内切酶 黏性末端 C T T A A G G A A T T C C T T A A G G A A T T C 目的基因 限制性内切酶 C T T A A G G A A T T C 同种限制性内切酶 　　被同一种限制酶切断的几个DNA是否具有相同的黏性末端？ 有相同的黏性末端 具有相同黏性末端的DNA是否可以重新连接起来？用什么工具连接？ DNA连接酶——“分子缝合针” C T T A A G G A A T T C C T T A A G G A A T T C 目的基因 C T T A A G G A A T T C C T T A A G G A A T T C DNA连接酶与DNA聚合酶