第2章染色体与DNA.ppt

第二章 染色体与DNA 组蛋白的特性 (1) 进化上的极端保守性 H1 H2A、H2B H3 、H4， (2) 无组织特异性 (3) 肽链氨基酸分布的不对称性 (4) 组蛋白的可修饰性。在细胞周期的特定时间可发生甲基化、乙酰化、磷酸化和ADP核糖基化等。修饰的意义：使染色质结构发生改变，使其它调控蛋白易于和染色质相互接触，从而间接影响转录活性。 (5) H5组蛋白的特殊性 反向重复（回文序列） 较长的回文结构(单链），可形成茎环结构 (发夹结构) 较长的回文结构(双链），可形成十字形结构 2）DNA 解螺旋酶 /解链酶（DNA helicase)：通过水解ATP获得能量来解开双链DNA。 E. coli中的解螺旋酶Rep沿前导链模板的3ˊ?5ˊ移动，而解螺旋酶(DnaB)I、II、III沿后随链模板的5ˊ? 3ˊ移动。 5）大肠杆菌的DNA聚合酶 E.coli 中的三种DNA多聚酶 6）DNA连接酶（1967年发现）： 若双链DNA中一条链有切口，切口一端是3ˊ-OH，另一端是5ˊ-磷酸基，连接酶可催化这两端形成磷酸二酯键，而使切口连接。 DNA连接酶在DNA复制、损伤修复、重组等过程中起重要作用。 连接酶基因的发现 E. coli lig基因突变，并不导致DNA合成的终止，但引起冈崎片段的异常积累。 3.2.3 DNA的复制过程（以大肠杆菌的为例） 复制的起始 解旋与解链：Ⅱ型拓扑异构酶即DNA旋转酶，引入负超螺旋，抵消复制叉推进时所产生的正超螺旋。解链酶消耗ATP，打开双链。 RNA引物的合成：DNA引发酶结合到DNA上并合成一段短的RNA引物，从而引发复制叉处先导链的复制。引发体（primosome) 复合体在后随链模板上移动时，每隔1000-2000nt就合成1个RNA，用作合成冈崎片段的引物。 DNA链的延伸：前导链和后随链的引物都由DNA Pol Ⅲ延伸。即，前导链和冈崎片段的合成均由DNA Pol Ⅲ催化。 RNA引物的切除及引物切除后所留缺口的填补：由DNA PolⅠ催化。 岗崎片段的连接 复制的终止 3.2.4 DNA复制的其它方式 滚环型：单向复制的一种特殊方式。如：ΦΧ174的双链环状DNA复制型（RF） 4 DNA的修复 一些碱基自发脱氨基，然后改变配对性质，造成氨基转换突变 腺嘌呤变为次黄嘌呤与胞嘧啶配对 鸟嘌呤变为黄嘌呤与胞嘧啶配对 胞嘧啶变为尿嘧啶与腺嘌呤配对 胞嘧啶脱氨基生成尿嘧啶 胞嘧啶脱氨基生成尿嘧啶, 在DNA复制时, 将会产生一个突变 碱基和核苷酸切除修复 1）通过特异的核酸内切酶识别损伤部位并在损伤部位的旁边产生切口。 2）由核酸外切酶水解包括损伤部位在内的一段DNA片段。 3）由DNA聚合酶以母链为模板复制合成一段新子链 4）由DNA连接酶封闭切口。 4.3 DNA的直接修复 错配修复发生于GATC的临近处，故也称为甲基指导的错配修复。 参与错配修复的蛋白因子： Dam甲基化酶；MutH、MutS、MutL；DNA解旋酶；SSB；DNA聚合酶；核酸外切酶；DNA连接酶。 错配修复能使复制的保真性提高100-1000倍。已在大肠杆菌、酵母和哺乳动物中发现这一修复系统。所有错配都可由这一系统所修复。 错配修复工作模型 4.1 错配修复 碱基转换突变 DNA糖苷消解酶，特异性切除受损DNA上的N－ ?－糖苷键，从而形成去除碱基位点（AP位点）。 4.2 切除修复 在DNA光解酶作用下,将环丁烷胸腺嘧啶二体和6-4光化物还原成为单体 直接修复 嘧啶二聚体的酶促光解 4.4 重组修复 DNA复制时,模板单链若有大段损伤,则新链复制合成可越过损伤部位而在其下游约1000nt处开始。新链的缺少部分,由相应的的同源单链部分通过同源重组而填补。然后再通过切除修复,修复原模板单链的损伤部位。 4）引物合成酶（引发酶）： 此酶以DNA为模板合成一段RNA,这段RNA作为合成DNA的引物（Primer)。该酶是一种特殊的以DNA为模板的RNA聚合酶，是DnaG基因的产物。 冈崎片段的合成需要RNA引物；前导链的合成也需要RNA引物。 DNA复制时使用RNA引物的意义:提高DNA复制的保真性。 染色体DNA复制时存在RNA引物的实验证明 + - - 新生链合成 + 很高 + 很低 + 中 5ˊ 3ˊ聚合活性 - - + 5ˊ 3ˊ外切活性 + + + 3ˊ 5ˊ外切活性 聚合酶Ⅲ 聚合酶Ⅱ 聚合酶Ⅰ 性质 聚合酶Ⅲ：DNA复制的主要聚合酶，其3ˊ 5ˊ外切活性的校对功能，提高了DNA复制的保真性。 聚合酶Ⅰ(DNA Pol Ⅰ)，Korn