如何构建基因文库.ppt

小结 随堂练习： 1、关于限制酶的说法中，正确的是（ ） A、限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基序列 B、EcoRI切割的是G—A之间的氢键 C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA D．限制酶只存在于原核生物中 1.　植物基因工程硕果累累　 2）利用转基因改良植物的品质 2.动物基因工程前景广阔　 3.基因工程药物异军突起　 4.基因治疗曙光初照 蛋白质工程的概念 将控制果实成熟的基因导入果实，获得转基因延熟果实 转基因延熟番茄 普通番茄 将与植物花青素代谢有关的基因导入花卉，改变花卉的颜色，以提高观赏价值 异想天开：发光树能做路灯吗？ 1）用于提高动物生长速度 2）用于改善畜产品的品质　 3）用转基因动物生产药物　 4）用转基因动物作器官移植的供体　 1）用于提高动物生长速度 导入外源生长激素基因，使转基因动物生长得更快 2）用于改善畜产品的品质　 将肠乳糖酶基因导入奶牛基因组，转基因奶牛分泌的乳汁中乳糖的含量大大减低，其它营养成分不变。 3）用转基因动物生产药物　 基因药物最理想的表达场所： ——乳腺生物反应器 转基因动物的乳腺 乳腺生物反应器的操作过程 获取目的基因 （例如血清蛋白基因） 构建基因表达载体 （在血清白蛋白基因前加特异表达的启动子） 显微注射导入哺乳动物受精卵中 形成胚胎 将胚胎送入母体动物 发育成转基因动物（只有雌性动物个体的乳腺中，转入的基因才能表达） 利用乳腺生物反应器产生的医药产品主要有： 抗凝血酶、血清白蛋白、生长激素、ａ-抗胰蛋白酶等　 利用乳腺生物反应器生产药物的优点： ①产量高；②质量好；③成本低；④易提取。 4）用转基因动物作器官移植的供体　 供体动物： 解决方法： 存在的难题： 猪 免疫排斥 将器官供体基因组导入 ， 以抑制 的表达或设法除去 ，再结合克隆技术，培育出没有免疫排斥反应的转基因克隆猪器官 某种调节因子 抗原决定基因 抗原决定基因 基因工程药品包括： 细胞因子（即淋巴因子如白细胞介素、干扰素等）、抗体、疫苗、激素等 利用基因工程制造转基因的工程菌，可高效率地生产出各种高质量、低成本的药品 PCR技术 原理： 前提： 条件： 方式： 结果： DNA复制 一段已知目的基因的核苷酸序列 以_____方式扩增， 即____（n为扩增循环的次数） 指数 2n 模板DNA；DNA引物；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶（Taq酶）等 使目的基因的片段在短时间内成快速地扩增 过程 变性、退火、延伸三步曲 变性：加热至90～95℃ 氢键断裂，双链DNA解链成为单链DNA 退火：冷却至55～60℃ 引物与模板的单链DNA互补配对结合 延伸：加热至70～75℃ 以目的基因为模板，合成互补的新DNA链 变性 退火 延伸 （3 ）人工合成 ——根据已知的氨基酸序列合成DNA 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 （通过DNA合成仪） 1、下列获取目的基因的方法中需要模板链的是 ①从基因文库中获取目的基因 ②利用PCR技术扩增目的基因 ③反转录法 ④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成 A．①②③④ B．①②③ C．②③④ D．②③ D 二、基因表达载体的构建——核心 （1）用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。 （2）用___________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。 （3）将切下的目的基因片段插入质粒的______处，再加入适量___________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 的黏性末端 切口 DNA连接酶 相同 1.过程 质粒 目的基因 限制酶切割 一个切口 两个黏性末端 两个切口 目的基因 DNA连接酶 表达载体 同一种 1. 目的基因与运载体结合所需的条件有 ①同一种限制酶 ②具有抗性基因的质粒 ③RNA聚合酶 ④目的基因 ⑤DNA连接酶 ⑥四种脱氧核苷酸 ⑦ATP A．①②③④⑤⑥⑦ B．①②④⑤⑥⑦ C．①②③④⑤ D．①②④⑤⑦ D 2.基因表达载体的组成 目的基因 启动子 终止子 标记基因 位于基因的首端, RNA聚合酶识别和结合位点，转录起点 位于基因的末端,终止转录 检测目的基因是否导入受体细胞和筛选含目的基因的细胞 它们有什么作用？ 编码蛋白质的结构基因 复制原点 复制的起点 ①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载