无菌制剂成品密封系统完好性验证药智论坛.pptVIP

无菌制剂成品密封系统 完好性验证——微生物侵入试验 黑龙江省食品药品监督管理局 药品安全监管处 谭宏宇 主要内容 定义和目的 适用范围 试验方法 结果评价 贮存稳定性 恶劣条件下的成品密封性验证 生产中的在线检漏 一、概述 微生物侵入试验是对最终灭菌容器的密封件系统 完好性的挑战性试验。目的是考察并确认容器密 封系统的完好性。 二、适用范围 本验证适用于无菌制剂生产中使用的输液瓶、西林瓶等需用多组件完成密封的容器完好性测试。 三、试验方法 在验证试验中，取输液瓶或西林瓶，灌入培养基，在正常生产线上压塞、压盖灭菌。此后，将容器密封面浸入高浓度运动性菌液中，取出、培养并检查是否有微生物侵入。 （一）试验样品的制备 1.在生产线上取足够量的容器，灌装SCDM/2（大豆 胰蛋白胨肉汤）培养基，使用自动压塞和压盖设 备将容器密封； 2.将灌装后的容器经最长灭菌程序灭菌。121℃、 30′； 3.取出、放冷，将每一试样倒转，使培养基与瓶口充分接触，在30～35℃下倒置培养14天; 4.选50个试样小心去除铝盖,注意不要破坏其密封口。将去铝盖时不慎损坏窗口密封性的所有试样剔除。按上述3中要求培养样品。在培养期内，当试验中发现任何带盖试样长菌时,则试验无效,须弃去全部试样，重新从头开始试验。 （二）确认培养基促菌生长能力—营养性试验 1.接种 所有试样培养14天均不长菌时，随机取20个带盖试样每个试样内接种0.1ml的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）ATCC 9027,菌液浓度10～100CFU/0.1ml。 试验菌选择原则： （1）所选菌种的体积大小，越小越好。 （2）运动能力强。 （3）适宜的培养基。 2.培养 在30～35℃下培养7天，或培养至所有试样 都呈阳性结果。 3.判定 若7天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样中，微生物生长良好，则容器内培养基的促菌生长能力可判为合格。 使用革兰染色和紫外灯下肉汤呈蓝绿色荧光的性质，来鉴定并确认试样容器内生长的菌为接入的铜绿假单胞菌。 （三）挑战菌悬浮液的制备 1.从铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)ATCC 9027的新鲜斜面上取一整环培养物，分别接入 含lOml 无菌培养基的试管中，在30～35℃下 培养16～18h。 2.将每管的培养物分别转入含1000ml 相同培养 基(SCDM／2)的容器内，于30～35℃下培养 22～24h。在培养结束时，能明显见容器内培 养基出现浑浊。 3.培养结束后的菌悬液即可用来作容器／密封系 统完好性试验。 （四）微生物侵入试验操作步骤 本试验须在生物安全柜内或其他不影响生产环境的地方进行。 1.将新鲜的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC 9027 的菌悬液倒入合适的盆中，用金属丝架固定试样容器，使试倒置在菌悬液中。 2.将50个经最长灭菌程序灭菌的试样倒置，并浸入菌悬液中。该组试样为A 组。 试样容器内的无菌培养基应充分接触封口内表面，样品的颈部及封口的外表面应完全浸泡在菌悬液中，见图4－54。 3.同时将25个去铝盖的试样容器倒置入菌悬液中， 该组试样为B组。 4.实验开始时取一份菌悬液，平板计数每毫升所含的活菌数。按2.3.1 确认试验用微生物是铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。 5.将A组和B组试样容器在菌悬液中持续浸泡约4h。 6.浸泡结束时，再用平板计数菌悬液的浓度。 7.从菌悬液中取出试样，擦干试样容器外残余的菌悬液，然后用含0.5％过乙酸的 70％异丙醇消毒容器外表面。 8.取装满培养基有铝盖和去铝盖的样品各两个，作阳性对照。阳性对照用样品制备方法同试样，但不经菌悬液浸泡，其外表用含0.5％过乙酸的70％异丙醇消毒。此后，接种入10～I00CFU铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC 9027，按步骤2进行培养基的营养试验。 9.将消毒后的容器放在塑料袋中，置30～35℃培养7天。操作中应特别注意不要损坏B组无铝盖试样胶塞的密封性。 10.挑战试验用菌悬液经灭菌后丢弃。 11.将挑战试验用的试样培养7天，观察检查试样容器内培养基中微生物的生长情况。 （1）对每一试样进行观察检查，有生长记作+，无生长计作－。 （2）如果试样容器长菌，按2.3.1 方法确认生长菌是挑战微生物——铜绿假单胞菌。 （3）如果所有容器都不长菌，则从浸过菌悬液的A 组取10 个试样，B 组5个试样，分别按2．进行培养基的营养检查。 四、结果评价 （一） 步骤三.（二）.2、步骤三.（四）.8、