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等电点聚焦（isoelectric focusing） 原理: 在一定抗对流介质（如凝胶）中加入两性电解质载体(Ampholyte,是一种多氨基多羧基的混合物，由异构物和同系物组成，其pK和pI值各自相异却又相近），当直流电通过时，便形成一个由阳极到阴极pH值逐步上升的梯度。两性化合物在此电泳过程中，就被浓集在与其等电点相等的pH区域，从而使不同化合物能按其各自等电点得到分离。 应用： 高效率分离纯化蛋白质 测定蛋白质分子量 免疫电泳immunoelectrophoresis 微量多槽免疫电泳 火箭免疫电泳 毛细管电泳 毛细管电泳又称毛细管区带电泳，它是在毛细管（?2-75μm）中装入缓冲液，从其一端注入样品，在毛细管两端加高压直流电实现对样品的分离，分离后的样品依次通过设在毛细管一端的检测器检出。该法克服了传统区带电泳的热扩散和样品扩散的问题，实现了快速和高效分离。 毛细管电泳是近年来发展起来的一项新技术，被认为是90年代最有影响的分离手段之一。目前已广泛用于氨基酸分析、蛋白质高效分离、指纹图谱研究、分离合成的寡核苷酸、 DNA序列测定及PCR产物的分析鉴定等。 毛细管电泳装置示意图 高压电源 光源 光电倍增管 数据采集 毛细管 缓冲液-样品 缓冲液 三、 离心技术 1．离心机类别 普通离心机 ?6000转/分 高速离心机 2-3万转/分 超速离心机 ?3万转/分 2．沉降系数（S）概念 3．超离心法类别 沉降速度法（sedimentation velocity） 沉降平恒法（sedimentation eguilibrium） 超速离心机工作原理图解 光源 转轴 转头 样品池 光学系统 液面 沉降界面 沉降物质 平衡池 沉降界面峰 浓度对距离的图谱 沉降系数（S） 生物大分子在单位离心力场作用下的沉降速度称为沉降系数。即沉降系数是微颗粒在离心力场的作用下，从静止状态到达极限速度所需要的时间。其单位用Svedberg，即S表示，S=1×10-13秒。? 沉降系数（S）与分子量（M）的关系 M = RTS D(1-??) Svederg方程: 生物分子的检测 1、蛋白质的测定 凯氏定氮法（含N量? 6. 25） 双缩脲法、Folin-酚法 紫外光度法（?max=280nm） 离心沉降法、电泳法、层析法 2、酶活力的测定 终点法、动力学法 3、氨基酸的测定 茚三酮法 Sangerf法、Edmam法、DNS法 4、核酸的测定 紫外光度法（?max=260nm） 分子杂交法 离心沉降法、电泳法 优秀精品课件文档资料 生化实验技术专题 主要内容和要求：以蛋白质分离纯化为例介绍生物大分子分离纯化的一般步骤和注意事项；介绍层析技术、电泳技术、离心技术的原理及其应用；总结蛋白质、核酸、酶、氨基酸测定的主要方法。 ——探生科技旗下Fantibody电子商务编辑部 相关帮助 需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎 fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台，网址： 需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的，可以访问探生网进行咨询，期待您的加入： 目录 第一节 生物大分子物质的制备 第二节 几种主要的生物化学实验技术 第三节 生物分子的检测 第一节 生物大分子物质的制备 一．一般过程 二．注意事项 三．纯化方案的设计和评价 例：宇佐美曲霉537酸性蛋白酶的纯化 材料的选择和处理 确立测定方法 细胞的破碎 有效成分的抽提 有效成分的浓缩 生物大分子分离纯化的一般步骤 层析法 电泳法 超离心法