生物技术与分离提取.pptVIP

二、离心分离技术 离心分离技术是借助于离心机旋转所产生的离心力，根据物质颗粒的沉降系数、质量、密度及浮力等因子的不同，而使物质分离的技术。 离心条件的确定 离心力 离心时间（与颗粒的沉降时间有关） 温度和pH值（防止欲分离物质的凝集、变性和失活） 超声波在传递过程中存在着的正负压强交变周期，在正相位时，对介质分子产生挤压，增加介质原来的密度；负相位时，介质分子稀散，介质密度减小。 四、微波萃取分离法 通常，萃取溶剂和固体样品中目标物由不同极性的分子组成，萃取体系在微波电磁场的作用下，具有一定极性的分子从原来的热运动状态转为跟随微波交变电磁场而快速排列取向。 原理：表面活性剂在水溶液中易被吸附到气泡的气—液界面上。表面活性剂极性的一端向着水相，非极性的一端向着气相，含有待分离的离子、分子的水溶液中的表面活性剂的极性端与水相中的离子或其极性分子通过物理(如静电引力)或化学（如配位反应）作用连接在一起。当通入气泡时，表面活性剂就将这些物质连在一起定向排列在气—液界面，被气泡带到液面，形成泡沫层，从而达到分离的目的。 六、色谱分离技术 利用混合物中各组分的物理化学性质 （分子的形状和大小、分子极性、吸附力、分子亲和力、分配系数等）的不同，使各组分以不同程度分布在两相中，其中一个相是固定的，称固定相，另一个相是流动的，称为流动相，当流动相流过固定相时，各组分以不同的速度移动，而达到分离的目的。 1、纸上色谱分离法 纸上色谱分离法原理：纸上色谱分离法是根据不同物质在固定相和流动相间的分配比不同而进行分离的。 利用吸附剂对不同物质的吸附力不同、而使混合物中的各组分分离的方法。吸附色谱分离技术是各种色谱技术中应用得最早的一类。由于吸附剂来源丰富，价格低廉，易再生，装置简单，又具有一定的分辨率等优点，故至今仍广泛应用。 溶剂洗脱法：加入样品溶液后，连续不断地加入洗脱剂进行冲洗，最初的流出液为纯溶剂，然后是吸附力最弱的组分，以后逐次出现的物质是按吸附力由弱到强的顺序分别洗出，吸附力量强的物质最后洗脱出来。 置换法 前缘洗脱法 吸附剂与洗脱剂的选择 吸附剂应具有的性质： (1)吸附剂应有适当的吸附力，表面积大； (2)吸附剂对被分离物有足够的分辨力，即对不同物质的吸附力有所不同； (3)吸附剂对被吸附物的吸附应是可逆的，即在一定的条件下可以解吸，以便洗脱； (4)吸附剂不会溶解在所采用的溶剂中，也不会引起被吸附物的化学改变； (5)吸附剂颗粒均匀，在操作时稳定，不会破裂。 4、分配色谱 分配色谱是利用各组分的分配系数不同而予以分离的方法。 分配色谱中，通常采用一种多孔性固体支持物吸着一种溶剂作为固定相，另一种与固定相溶剂互不相溶的溶剂可以沿固定相流动，称为流动相。 当某溶质在流动相的带动下流经固定相时，该溶质在两相之间进行连续的动态分配，由于各物质有不同的分配系数，移动速率也就不相同，从而达到分离的目的。 5、离子交换色谱 离子交换色谱是利用离子交换剂上的可解离基团（活性基团），对各种离子的亲和力不同而达到分离目的的一种色谱分离技术，广泛应用于各种物质的分离纯化。 离子交换剂 含有若干活性基团的不溶性高分子物质，即在不溶性母体上引入若干可解离基团（活性基团）而成。 不溶性母体的高分子物质：苯乙烯树脂、酚醛树脂、纤维素、葡聚糖、琼脂糖或其它聚合物。 活性基团可以是酸性基团：磺酸基(-SO3H)，磷酸基(-PO3H2)，亚磷酸基(-PO2H)，羧基(-COOH)，酚羟基(-OH)等。引入酸性基团的交换剂可离解出H+，与其它阳离子交换，这类离子交换剂属于阳离子交换剂。 活性基团是碱性基团：季胺[-N+(CH3)3]，叔胺[-N(CH3)2]，仲胺[-NHCH3]，伯胺[-NH2]等含氨基的基团。引入含氨基碱性基团的交换剂，可与OH-结合后，与其它阴离子交换，这类离子交换剂属于阴离子交换剂。 强酸型阳离子交换剂（含有磺酸基-SO3H等）对各种正离子的亲和力次序为： Fe3+ Al3+ Zn2+ Cu2+ Ni2+ Co2+ Fe2+ Ba2+ Cr2+ Ca2+ Mg2+ Cs+ Rb+ K+ Na+ H+ Li+ 弱酸型阳离子交换剂（含有羧基-COOH，酚羟基-OH等）对氢离子(H+)的亲和力特别高。因此转为氢型时很容易，仅需很少量的酸即可。 离子交换剂的选择 选择离子交换剂时应考虑下列因素： (1)样品离子带何种电荷； (2)离子的浓度； (3)被分离物质相对分子量的大小； (4)离子与交换剂的亲和力大小； (5)离子交换剂及欲