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第二章 植物组织培养的条件 第一节 植物组织培养的条件 1. 植物组织培养最基本的前提条件：用于培养的外植体细胞必须具有全能性 2.离体隔离 3.适宜的培养条件 环境条件：光照、温度、湿度。 营养条件：培养基。 一、环境条件 植物组织培养在最适宜的温度下生长分化才能表现良好，大多数植物组织培养都是在23-27 ℃之间进行，一般采用25土2℃。 组织培养中光照也是重要的条件之一，主要表现在光强、光质、以及光照时间方面： ★一般来说，光照强度较强，幼苗生长的粗壮，而光照强度较弱幼苗容易徒长。一般光照强度为1000~5000 lx ★光周期，最常用的周期 是16h的光照，8h的黑暗。 ★光质，对愈伤组织诱导， 培养组织的增殖以及器官 的分化都有明显的影响。 湿度的影响包括培养容器保持和环境的湿度条件，容器内湿度要保持在99%左右，环境的相对湿度一般要求70％-80％的相对湿度。 其它因素 渗透压 培养基中由于有添加的盐类、蔗糖等化合物，因此，而影响到渗透压的变化。通常1-2个大气压对植物生长有促进作用，2个大气压以上就对植物生长有阻碍作用， 而5-6个大气压植物 生长就会完全停止， 6个大气压以上植物 细胞就不能生存。 其它因素 通气状况 氧气是组织培养中必需的因素，瓶盖封闭时要考虑通气问题，可用附有滤气膜的封口材料。 二、营养条件——培养基 培养基：是离体培养的组织或者细胞赖以生存的营养基质，是为离体培养材料提供的近似于生物体内生存的营养环境，满足其正常生长和维持其完整结构及功能。 培养基的组成 元素名称 添加形式 N KNO3,NH4NO3 大量元素 P KH2PO4 , NaH2PO4 　　　　　　K　　　　　　KCl, KNO3 , (≥0.5mmol/L Ca CaCl2 ·2H2O, Ca(NO3)2 · 4H20 或100mg/l) Mg Mg2SO4 · 7H2O S Mg2SO4 · 7H2O, Na2SO4 微量元素 Fe Fe-EDTA(Na2- EDTA+FeSO4 ·7H2O ) B H3BO3 Mn MnSO4· 7H2O (≤ 0.5mmol/L) Cu CuSO4 Mo Na2MoO4 · 2H2O Zn ZnSO4 ·7H2O I KI Co CoCl3 碳水化合物　 选用种类：蔗糖（或葡萄糖、果糖）等 蔗糖浓度：使用量1-5%，常用量为2－3%，幼胚培养可提高到4－15% 蔗糖具有热易变性，高压灭菌后部分糖会分解。 蔗糖在培养基中的作用： 1. 为培养物提供能源和碳骨架 2. 可以调节培养基的渗透压 肌 醇 促进愈伤组织生长、胚状体和芽的形成 对组织细胞繁殖、分化的促进作用 浓度100 mg/L 细胞分裂素类 ( cytokinin ) （1）种类：6－BA　KT　ZT （2）作用：诱导不定芽分化和茎、苗增殖。 （3）浓度：0.05－10. 0mg/L 激素配比模式 生长素与细胞分裂素的比例决定着发育的方向（形成愈伤组织；长根；长芽）。 高 有利于根的形成 生长素/细胞分裂素 和愈伤组织