第四章抗体制药20100427.ppt

第四章 抗 体 制 药 第一节 概 述 1890年Behring和北里柴三郎 发现白喉抗毒素,建立了血清疗法,开创了抗体制药。 1937年Tiselius用电泳法将 血清蛋白分离为白蛋白、α、β、γ球蛋白，并证明抗体活性主要 存在于γ球蛋白组分。 抗体是指能与相应抗原特异性结合具有免疫功能的球蛋白。 抗体的产生：机体免疫系统受抗原刺激后，B淋巴细胞被活化增殖和分化为浆细胞，由浆细胞合成和分泌的球蛋白。 20世纪60年代发现多发性骨髓瘤是浆细胞癌变形成的恶性增殖性疾病。病人血清中出现同抗体结构类似的球蛋白， 统称为免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）。所以Ig是化学结构的概念，而抗体是生物学功能的概念。 多克隆抗体：病原微生物含有多种抗原决定簇的抗原物质，因此这些抗体制剂也是多种抗体的混合物，故称多克隆抗体。 1975年Kohler和Milstein首先利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体（monoclonal antibody McAb）。 单克隆抗体具有高度特异性、均一性、来源稳定、可大量生产等特点，为抗体制备和应用提供了全新的手段，还促进了基础和临床医学的发展。 单克隆抗体作为抗体制剂，在临床上主要用于疾病的诊断和治疗。 单克隆抗体检测某些疾病有关的抗原，辅助临床诊断。用放射性核素标记单克隆抗体进行肿瘤显像，做免疫定位诊断。 单克隆抗体用于临床治疗，CD3单克隆抗体作为免疫抑制剂对器官移植免疫排斥有抑制作用。 以单克隆抗体作为载体的药物对肿瘤进行定向治疗。 第二节 单克隆抗体 单克隆抗体是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的。 一、免疫学知识 人体和动物都有免疫系统，包括特异性免疫和非特异性免疫。 1）特异性免疫又分为体液免疫和细胞免疫。 体液免疫是当机体受到抗原刺激后，来源于骨髓的小淋巴细胞-B淋巴细胞进行增生和分化为浆细胞，进而合成各种免疫球蛋白（抗体），然后在体液中发挥免疫作用的过程。 细胞免疫主要是指机体受到异己物质抗原的刺激后，一类小淋巴细胞-依赖胸腺的T细胞发生增生，分化，直接攻击靶细胞或间接地释放一些淋巴因子从而使机体达到免疫的过程。 非特异性免疫主要是由宿主的屏障（皮肤、黏膜、血脑屏障、血胎屏障），吞噬细胞（白细胞的一种）正常组织和体液中的抗菌物质（不直接杀死病原体，但能配合免疫细胞、抗体或其他防御因子使它们发挥较强的免疫功能，如补体、干扰素。）以及炎症反应（存在于红细胞、白细胞和血小板等细胞和组织重点组胺和5-羟色胺在机体感染病原体而引起炎症反应时，可使炎症部位的毛细血管迅速扩张，血流量增加，毛细血管通透性增强，大量淋巴细胞从毛细血管穿越进入炎症区）。 淋巴系统是循环系统的一部分，由淋巴管和产生淋巴细胞和生成抗体的淋巴器官（淋巴结、扁桃体、脾、胸腺和消化管内的各种淋巴组织）组成。 B淋巴细胞虽然可以被外来的抗原所激活并产生相应单一、均匀的特异性抗体，但却无法在体外进行繁殖和传代；骨髓瘤癌变细胞在体外具有很强的繁殖能力，将二者进行融合，制成杂交瘤细胞，就可以在体外持续分泌出成分单一的特异抗体，即单克隆抗体。 二、抗原与动物免疫 制备特定抗原的单克隆抗体，首先要制备用于免疫的适当抗原，再用抗原进行动物免疫。 有的抗原可以用化学合成：地高辛 多数抗原物为混合物须经免疫、筛选、克隆化。 为使杂交瘤细胞稳定，免疫动物和骨髓瘤细胞供体同一品系动物进行免疫。 目前常用的骨髓瘤细胞系多来自BALB/c小鼠和 LOU大鼠，因此免疫动物也采用相应的品系。 免疫的方法采用体内免疫法和体外免疫法。 体内免疫法适用于免疫原性强、抗原量较多时应用，一般用8～12周龄雌性鼠。 颗粒性抗原（如细菌细胞抗原）的免疫原性强，可不加佐剂，直接注入腹腔10个细胞进行初次免疫，间隔1～3周，再追加免疫1～2次。 可溶性抗原按每只小鼠10～100μg 抗原与福氏完全佐剂等量混合后注 入腹腔内，进行初次免疫，间隔 2～4周，再用不加佐剂原抗原追加免疫1～2次。 一般再采脾细胞前3日由静脉注射最 后一次抗原。刺激B细胞分裂。 脾内免疫法即在麻醉下直接将 0.1～0.2 ml抗原注入脾脏进行免疫。细胞抗原需105个，可溶性抗原需10μg。