人教版高中生物选修一（课件）-专题55.3血红蛋白的提取和分离.ppt

一 二 知识精要 典题例解 迁移应用 知识架构 一 二 知识精要 典题例解 迁移应用 知识架构 利用凝胶色谱法分离蛋白质时,蛋白质洗脱出来的顺序是(　　) ①相对分子质量最大的　②相对分子质量最小的 ③相对分子质量适中的 A.①②③　　　 B.③②① C.①③② D.②③① 解析：相对分子质量较大的蛋白质容易通过凝胶间隙,先被洗脱出来;相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部,后被洗脱出来;相对分子质量适中的,能进入凝胶的内孔隙中孔径大小相应的部分,洗脱出来的时间也居中。 答案：C 一 二 知识精要 典题例解 迁移应用 知识架构 1.样品处理、分离与纯化的目的不同 一 二 知识精要 典题例解 迁移应用 知识架构 2.分离血红蛋白溶液的结果 知识架构 一 二 在装填凝胶色谱柱时,要注意凝胶装填的要紧密、均匀。因为如果装填的不够紧密、均匀,就会在凝胶色谱柱内形成无效的空隙,使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过,搅乱洗脱液的流动次序,影响分离效果。同时在凝胶色谱操作中,不能发生洗脱液流干,漏出凝胶颗粒的现象。一旦发生以上现象,凝胶色谱柱必须重新装填。 【例题】 随着人类基因组计划的进展和多种生物基因组测序工作的完成,人类跨入了后基因组和蛋白质组时代。对蛋白质的研究与应用,首先要获得纯度较高的蛋白质。 (导学 Ⅰ.血红蛋白提取的具体过程可分为: (1)红细胞的洗涤。具体操作过程是??　;? (2)　　　　　　　　　　;? (3)分离血红蛋白溶液。血红蛋白混合液在离心管中离心后,从上往下数第　　　层是红色透明液体即为血红蛋白的水溶液;? (4)透析。 Ⅱ.透析后的样品还需经过凝胶色谱法进一步纯化,其目的是　　　　　　　　　　　　　,装填凝胶色谱柱时,要注意色谱柱内不能有气泡,这是因为　　　　　　　　　　　　　。? Ⅲ.判断纯化的蛋白质是否达到要求,可用电泳法对样品进行　　　　　,电泳是指　　　　　　　　　　　　　　　。? 解析：Ⅰ.(1)红细胞的洗涤目的是去除杂蛋白,过程是将采集的血样低速短时间离心,吸出上层透明黄色血浆,再用五倍体积的生理盐水低速短时间离心,重复洗涤三次。(2)血红蛋白的释放:在蒸馏水和甲苯作用下,红细胞破裂释放出血红蛋白。(3)分离血红蛋白溶液:试管中的溶液分为4层。第1层为无色透明的甲苯层,第2层为白色薄层固体,是脂溶性物质的沉淀层,第3层是红色透明液体,这是血红蛋白的水溶液,第4层是其他杂质的暗红色沉淀物。血红蛋白混合液在离心管中离心后,从上往下数第3层是红色透明液体即为血红蛋白的水溶液。(4)透析:可以去除样品中相对分子质量较小的杂质,或用于更换样品的缓冲液。Ⅱ.透析后的样品还需经过凝胶色谱法进一步纯化,其目的是去除相对分子质量较大的杂质蛋白。装填凝胶色谱柱时,要注意色谱柱内不能有气泡,这是因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,降低分离效果。Ⅲ.判断纯化的蛋白质是否达到要求,可用电泳法对样品进行纯度鉴定,电泳是指带电离子在电场的作用下发生迁移的过程。 答案：Ⅰ.(1)将采集的血样低速短时间离心,吸出上层透明黄色血浆,再用五倍体积的生理盐水低速短时间离心,重复洗涤三次　(2)血红蛋白的释放　(3)3 Ⅱ.去除相对分子质量较大的杂蛋白　气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,降低分离效果 Ⅲ.纯度鉴定　带电离子在电场的作用下发生迁移的过程 易错突破 合作探究 自主预习 易错突破 合作探究 自主预习 易错突破 合作探究 自主预习 易错突破 合作探究 自主预习 易错突破 合作探究 自主预习 目标导航 预习导引 目标导航 预习导引 一 二 一、分离蛋白质的原理与方法 1.分离蛋白质的原理 2.分离蛋白质的方法 (1)凝胶色谱法 ①概念:根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法,也叫分配色谱法。 目标导航 预习导引 一 二 ②过程及原理 b.分离的过程 目标导航 预习导引 一 二 c.分离原理:依据相对分子质量的不同而将蛋白质分离。 (2)电泳法 ①电泳的概念:指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。 ②原理:利用了待分离样品中各种分子的带电性质的差异、分子本身的大小以及形状的不同,使带电分子在电场中产生不同的迁移速度,从而分离样品中的各种分子。 ③分离方法:琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。其中后者使用时通常加入带负电荷多的SDS,形成“蛋白质-SDS复合物”,使蛋白质迁移速率仅取决于分子的大小。 3.缓冲溶液 (1)组成:通常由1~2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例,可配制不同pH的缓冲液。 (2)作用:抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响,维持pH基本不变。 目标导航 预习导引 一 二 缓冲溶液中含对酸碱起缓冲作用的缓冲对,每一缓冲对均由弱酸和相应