奶粉中三聚氰胺的测定文献综述.doc

高效液相色谱法测定奶粉中三聚氰胺的含量(melamine)化学式为C3H6N6，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，俗称密胺、蛋白精。 三聚氰胺的危害以及不法厂家掺入三聚氰胺的目的： 2008年9月发生了“毒奶粉”事件，很多生产奶粉的公司非法向奶粉中添加三聚氰胺以提升奶粉中的氮含量。由于三聚氰胺(含氮量66%)与蛋白质(平均含氮量16%)相比含有更高比例的氮元素，所以被一些不法分子利用，添加在食品中以造成食品蛋白质含量较高的假象。由于当时国家使用的蛋白质中氮含量的测定方法是凯氏定氮法通过样品消解将样品中所有氮元素转化为氨，通过H2SO4或HCl标准溶液进行滴定，所以无法区分蛋白质氮和非蛋白质氮，掺入三聚氰胺可以提升氮含量从而达到提升“蛋白质含量”的目的[2]。然而三聚氰胺对人体是有危害的，尤其奶粉是给小孩子吃的，危害更大。大剂量的三聚氰胺导致当时很多食用奶粉的婴幼儿出现泌尿系结石。研究表明，三聚氰胺对肾小球、肾小管功能有损害, 且年龄越小、服用三聚氰胺污染奶粉时间越长损害程度越重[3]。 2008 年10 月7 日，卫生部等5 部门联合发布公告，确定了乳与乳制品中三聚氰胺临时管理限量值（即婴幼儿配方乳粉中三聚氰胺的限量值）为1 mg/kg，液态奶(包括原料乳)、奶粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值为2.5 mg/kg。 三聚氰胺含量测定的各种方法m），流动相为离子对试剂缓冲溶液乙腈C8 或C18 柱形成化学结合，所以柱平衡时间长，选择性差；而离子对试剂的使用将缩小各物质间的差异，奶粉中多种物质（如水溶性维生素、核酸等）均可与离子对试剂结合并在色谱柱中形成保留，严重干扰目标成分测定。[1] 而且，该法的检测限为2mg/kg，比国家规定的婴幼儿奶粉的三聚氰胺的限量值1mg/kg要高，也就是说该法对于婴幼儿奶粉中三聚氰胺含量的检测不达标。只能用于检测非婴幼儿的液态奶、奶粉中三聚氰胺的含量（限量值为2.5mg/kg）。 2.气相色谱－质谱联用法： 2.1.实验方法：[5] 取待测样品放入的聚酯离心管中，再加入0．1 ml 的苯代三聚氰胺做内标,涡旋混匀后加入提取液20 ml再涡旋1 min超声提取，离心10 min。取1 ml 置于2ml的GC进样瓶中氮气吹干，准备衍生化。在吹干的样品残渣中加入200μl含1% TMCS的BSTFA衍生剂及200μl吡啶，充分涡旋混匀后，置(70 ± 5) ℃的烘箱中，衍生反应45 min，冷却至室温后供分析测定。 色谱和质谱条件：DB-5 TH 石英毛细管柱( 15m ×0.25 mm，0.10μm) ; 进样口温度: 280 ℃; 质谱仪接口温度:280 ℃; 程序升温: 初始温度75 ℃，以15 ℃ /min 升至300 ℃，保持5 min; 进样模式: 无分流进样; 进样量: 1 μl; 载气流速:1 ml /min。 2.2.小结： 该法预处理较简单，分析速度快，检出限符合要求。适合用于奶粉中三聚氰胺类有机会含量的测定。 检出限实验结果表明，在0.1 ～ 50.0 mg /L 范围内峰面积( Y) 与浓度( x) 呈现出良好的线性关系，相关系数r = 0.9998。结合质量浓度为0.1 mg /L 的混合标准溶液谱图，根据信噪比( S /N) 为3计算三聚氰胺的检出限。结果表明，该方法的检出限为0.1μg/g，即0.1mg/kg。 回收率实验表明，回收率在101%到106%之间，符合测量要求 3.荧光光谱法：[6] 3.1.实验原理： 三聚氰胺能够与荧光素在水溶液中发生作用, 使荧光素的荧光强度增强, 且在一定浓度范围内, 荧光强度与三聚氰胺的浓度成线性关系, 据此建立了一种新的测定奶制品中三聚氰胺的荧光分析方法。 三聚氰胺呈弱碱性, 荧光素为酸性染料, 二者发生相互作用, 使荧光强度增大。随着三聚氰胺浓度的增大, 与荧光素发生作用的三聚氰胺越多, 荧光强度越大, 且在一定范围内加入三聚氰胺的量与荧光素的荧光强度成线性关系。 3.2.实验条件选择： a.pH 7.0时, 荧光强度最大; b.实验选择质量浓度为0.05mg /L的荧光素溶液; c. pH 7.0时, 质量浓度为0.005mg /L的三聚氰胺溶液和0.05mg /L的荧光素溶液混合, 每隔 2h对其测定一次荧光强度, 可以测得荧光素与三聚氰胺作用需要一定的时间, 体系在12h之 后荧光强度达到最大, 即三聚氰胺和荧光素的基本反应完全。 3.3.实验方法： 取1g奶粉样品, 加入5mL三氯乙酸水溶液(10.0g/L)充分振荡, 加入0.5mL乙酸铅水溶液(22.0g/L), 加入2mL三氯甲烷, 充分