PCR技术操作注意事项幻灯片.pptVIP

全称：聚合酶链式反应 (Polymerase Chain Reaction)， 简称：PCR 是一种分子生物学技术，用于放大扩增特定的DNA片段。 可看作生物体外的特殊DNA复制。 常见问题！！！ 问题1： 无扩增产物 原因 现象 对策 问题2： 非特异性扩增 现象 原因 对策 问题3： 拖尾 现象 原因 对策 问题4： 假阳性  现象 原因 对策 现象：正对照有条带，而样品则无   ■ 原因: 1.模板:含有抑制物，含量低 2.Buffer对样品不合适 3.引物设计不当或者发生降解 4.反应条件：退火温度太高，延伸时间太短 对策: 1.纯化模板或者使用试剂盒提取模板DNA或加大模板的用量 2.更换Buffer或调整浓度 3.重新设计引物（避免链间二聚体和链内二级结构）或者换一管新引物 4.降低退火温度、延长延伸时间 现象：条带与预计的大小不一致或者非特异性扩增带  原因： 1.引物特异性差 2.模板或引物浓度过高 3.酶量过多 4.Mg2+浓度偏高 5.退火温度偏低 6.循环次数过多