蛋白质组学实验.pptVIP

优化表达 （1） 增加蛋白质溶解性及折叠: 温度: 37?C 蛋白质以聚集的形式表达--包涵体 30?C 可溶的有活性的蛋白 细胞周质定位: 有利于蛋白折叠及二硫键的形成 稀有密码子: 多数氨基酸都有一个以上的密码子, 但有一些 E. Coli很少 使用, 当异源目的基因的mRNA过表达时, tRNA 的数量直接 反应密码子的偏倚性, 一个或多个tRNA的稀有或缺少会导 致翻译的停止 毒性基因和质粒稳定性: 抗生素的使用 补充葡萄糖 提高翻译水平： 调整SD序列与AUG间的距离、点突变改变碱基、增加mRNA稳定性 减轻细胞的代谢负荷，提高表达水平： 细菌的生长和外源基因的诱导表达分开。 化学诱导，温度诱导。 提高蛋白质稳定性，防止降解。 表达融合蛋白，表达分泌蛋白（防止降解，减轻代谢负荷、恢复天然构象） 优化表达 （2） 实验操作 Section 2 实验器材 1、E. coli BL21(DE3)/pET-DSBA 每组同学（30ml菌液/三角瓶） 2、IPTG （乳糖结构类似物） 3、LB(Ampr) 4、摇床 5、离心机 实验步骤(1) 原核表达载体转化到BL21(DE3