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上海市临床检验中心陈悦 细菌性突发公共卫生事件的实验室检验技术 细菌性突发公共卫生事件分类 细菌性呼吸道疾病:群体性发热 细菌性食源性疾病:食物中毒 细菌性生物恐怖事件:炭疽白粉事件 细菌性呼吸道疾病 流行性脑脊髓膜炎(简称流脑) 链球菌病(猩红热、人感染猪链2病) 肺鼠疫 土拉热（弗朗西斯菌） 肺炭疽 军团菌病 细菌性生物恐怖事件 炭疽白粉事件：直接吸入导致肺炭疽 病原体：毒力型炭疽杆菌，即含有毒素质粒（pxo1）和荚膜质粒（pxo2）的菌株（tox+cap+） 并不是要从分类学的角度去决定一种细菌是不是炭疽芽孢杆菌，或蜡样芽孢杆菌的炭疽亚种，而是这种细菌能不能引起炭疽疾病。而炭疽疾病的决定因素是那两个质粒上的致病基因，缺一不可 细菌性食源性疾病 由细菌通过摄食而进入人体的，使人体患感染性或中毒性的一类疾病。属食源性疾病范畴，主要包括细菌性肠道传染病和细菌性食物中毒 细菌性肠道传染病 属我国法定传染病，主要包括霍乱、痢疾、伤寒、副伤寒及新近参照传染病管理的由肠出血性大肠埃希菌O157引起的出血性肠炎 细菌性食物中毒 人体摄入了被细菌或其毒素污染的食品后所出现的非传染性急性、亚急性疾病 各类样品采集方法（1） 粪便、肛拭：粪便标本应尽量在病程早期和治疗前采集，同时应采集新鲜粪便，选取有脓血、粘液部分3-5克、水样便取含絮状物的2-5ml，盛于无菌容器中及时送检。若无法获得粪便时，可用保存液或增菌液湿润过的棉拭子插入肛门4-5cm深处（小儿2-3cm），轻轻转动一圈，擦取直肠表面的黏液后取出，盛入运送培养基或保存液中送检。注意为保证多个检验项目的开展，同一病人应至少采集2支肛拭 各类样品采集方法（2） 呕吐物：直接放入无菌容器中及时送检 咽拭样品：采集时应将棉签檫拭咽喉及扁桃体红肿处（特别是白膜处），然后将棉签插入4-5ml生理盐水中，尾部弃去 血液：采集患者急性发病期（3天内）和恢复期（2周左右）各3ml全血分离血清送检 检验项目 霍乱弧菌、副溶血弧菌及其它致病性弧菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌、沙门菌、变形杆菌、致泻性大肠埃希菌、空肠弯曲菌、小肠结肠耶尔森菌、志贺菌、溶血性链球菌及单核细胞增生李斯特菌引起的食源性突发事件的样品检验 细菌性食源性疾病的检验宗旨 竭尽全力尽快找到病原体 快速、准确 可与传统方法不一定完全相同 检验程序 1 . 样品采集 ↓ 2. 初步检验→活菌数、直接镜检(涂片→染色→镜检) ↓ 3. 分离培养 (包括增菌培养和直接平板培养) ↓ 4. 初筛试验 ↓ 5. 纯培养 ↓ 6. 全面鉴定 直接涂片染色镜检 观察存在于检品中特种形态的细菌如霍乱弧菌、弯曲菌，为进一步的检验提供有用的信息 检样的处理 病源检样因含较多病原菌而一般无须做预增菌处理，但若病源检样为服过抗生素后采集的检样应按检验项目要求而进行预增菌处理以保护和放大目的病原菌 直接插入2ml TSB管37℃预增菌4～6h 直接培养 将无须做增菌处理的病源检样按检验项目要求直接接种于各相应培养基 增菌培养及接种 将预增菌处理后的服过抗生素后采集的病源检样按检验项目要求接种各相应增菌液培养 增菌培养后接种于各相应培养基 初筛试验 克氏双糖/三糖铁/肠道综合发酵管1、管2 PCR VIDAS 可疑菌的鉴定 全面生化试验（API、ATB、VETIK、IDS、SWF、手工鉴定等） 噬菌体试验 血清分型 毒素或毒素基因测试 毒素或毒素基因测试 霍乱弧菌肠毒素、葡萄球菌肠毒素、EIEC侵袭毒素、ET