细菌形态学检查课稿.pptVIP

阿克苏职业技术学院检验教研室 主讲教师：马学林 细菌形态学检查 形态学检查的目的： ①从形态上识别细菌，为细菌分类与鉴别的基础； ②了解被检标本中有无细菌； ③直接从标本中观察到某些细菌，可对少数疾病初步诊断（如结核，脑膜炎等）。 1.普通光学显微镜 原理 自然光的波长为0.4μm；显微镜的最大分辨率为0.2μm（前者的一半）；肉眼的分辨率为0.2mm，故放大1000倍，使0.2μm放大到0.2mm。 第一节 显微镜（microscope） 2.暗视野显微镜 常用于活的微生物的动力检测 3.相差显微镜 利用相差板的光栅作用，使光波穿过标本中密度不同的部位时，引起位相差，显出光的强度的明暗对比。 应用于活菌的形态及某些内部结构的观察。 4.荧光显微镜 以紫外光或蓝紫光作光源，因其波长比自然光短，故分辨率比普通显微镜要高。 5.电子显微镜： 以强大的电子流代替光源，因电子流的波长仅为0.005nm，（仅为可见光源的几万分之一），故其放大倍数可达10万-100万倍，可看清1nm的物体。 电镜种类 透射电镜：因电子的透射作用，可观察细菌，virus内部结构，通过荧屏显示。 扫描电镜：因电子流对物体的表面进行扫描，可清楚的显露出物体的三维空间的立体结构，可用于对细菌，virus的结构观察。 仅用于细菌动力的观察。 1.压滴法 明视野法、暗视野法。 2.悬滴法 3.毛细管法：孔径0.5-1.0mm，长约60-70mm毛细管，以此管轻取细菌培养物，待液体进入后，两端火焰封融。用于厌氧菌的动力观察。 注意：区别细菌的运动与布朗运动。 第二节 不染色细菌标本检查法 一：染料：大多是人工合成的含苯环或苯的有机物。 色 基：即连接在苯环上带双键的有色化学基团 ， 它使染料带颜色，其色基越多，颜色越深 如-NO2(硝基）\ -N=N-（偶氮基） 助色基：不显色，它决定了染料与被染物之间的亲和 性，且有酸、碱之分，决定了染料的酸碱性: -NH2（碱性） -OH （酸性） 第三节 细菌染色标本的检查 常用染料种类： 碱性染料：美兰，结晶紫，碱性复红等，色基带正电，易与带负电的被染物结合着色 酸性染料：伊红，酸性复红，刚果红，色基带负电 复合染料：可与cell浆结合 单纯染料：多为偶氮化合物，亲和力低，不溶于水，而溶于脂溶剂。 二 染色程序： 基本步骤： 涂片（干燥） 固定 染色 （初染、煤染、脱色、复染） 1.涂片制备： 液体标本（细菌培养液）直接涂于玻片上； 固体培养基上的培养物 ，取生理盐水涂片，涂成蚕豆大小的菌膜。 2.固定： 目的：①杀死细菌，使蛋白质凝固，易于着色 　 ②改变其通透性，利于染料进入 ③使菌体附着在玻片上 ④保持细菌原有的形态、结构 方法：常用的火焰加热固定法。 3.染色： 目的：加固初染 媒染剂：石炭酸，碘液，明矾，酚等，也可加热。 目的：使不该染上颜色的部分脱下颜色 脱色剂：酸（为碱的脱色剂） 碱（为酸的脱色剂），还有甲醇，乙醇等 脱色机制：影响蛋白质的电离程度，改变其电荷的 性质或数量，从而影响细菌与染料结合的程度 初染 媒染 脱色 （对比染色） 常用染料：稀释复红、沙黄（与紫色对比）、 美兰、苦味液（与红色对比） 复 染 三：常用的染色法 （一）单染法： 用一种染料染，细菌及周围部分都染成同一种颜色主要用于观察细菌的形态、大小、排列及简单的结构，如美兰染色，复红染色。 （二）复染法： 用两种以上的染料，将不同的细菌或同一细菌的不同结构染成不同的颜色。 由丹麦细菌学家Christain Gram首创，已有100多年的历史。 染料： 结晶紫、卢戈氏碘液、 95%酒精、稀释石炭酸复红 1.革兰染色法（Gram stain): 原理：