组织培养育苗技术组织培养育技术苗技术.ppt

（三）培养基的制备步骤 1 母液的配制和保存 1．1 试剂的称量： 培养基的组成成分应是纯净的化学药品，一般应尽可能采用分析纯药品。为了保证培养基成分能够长期保持不变，一些标准成分应有适当数量的贮备。每次称量药品时，应特别注意防止药匙污脏而引起的药物交叉感染。称量时应特别细小，最好由两人校正，尤其是生长调节物质和微量元素，因其用量甚微，称量要非常精确。稍有差错，会给培养带来严重的影响。 1 母液的配制和保存（二） 1．2 母液的配制和保存：经常使用的培养基，可先将各种药品配成10倍或100倍的母液，贴好标签，放入冰箱保存，用时再按比例稀释。一般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素、按基酸等母液，其中维生素和氨基酸类可以分别配制，也可以混在一起。现以MS培养基为例加以说明（见表12）。配制母液一般用重蒸馏水或蒸馏水。 1．3 植物生长调节物质的配制：配制的浓度一般为0.1～0.5毫克/毫升。吲哚乙酸（IAA）先用少量95%的酒精溶解后加水定容。萘乙酸（NAA）先用95%的少量酒精或热水溶解后加水定容。吲哚丁酸（IBA）用50%的酒精溶解后加水定容。2,4—二氯苯氧乙酸（2,4—D）用1N（N表示当量浓度）的NaOH溶解后加水定容。激动素（KIN）和苄基嘌呤（BA）先溶于少量1N的盐酸中，再加水定容。玉米素（ZT）先用少量95%的酒精溶解，再加水定容。 2 培养基的制备： 2-1 做好各种准备。 第一 将贮藏母液按顺序排好。 第二 准备好所需用的各种玻璃器皿，如量筒、烧杯、 吸管、玻璃棒、漏斗等，放在指定的位置。 第三 称好所需的琼脂、蔗糖，配好所需用的生长调节物质。 第四 准备好重蒸馏水及盖瓶用的棉塞、橡皮筋等。 第五 慢慢熔化琼脂 由于琼脂比较难溶解，所以要及早放在水浴锅上，让其慢慢熔化。 2-2 在琼脂中加入药品 2-2-1 在量筒内放一定量的重蒸馏水，以免加入药液时溅开。再按母液顺序，依母液的浓度量取规定的量加入量筒中。母液加完后， 再在量筒中加入一定量的生长调节物质。加完后可倒入溶化的琼脂中。 注意： 加入母液或生长调节物质时，应事先检查这些药品是否已变色或产生沉淀，已失效的就不要再用。 2-2-2 在量筒内再放入蔗糖，定容到所需的体积，倒入溶化的琼脂中。 2-3-3 继续加温，不断搅拌，直至使琼脂完全溶解。 注意： 琼脂必须要充分熔化，以免造成浓度不匀；培养基培养基太软，无法固定材料。 3 pH值的调整： 培养基配好后，再用0.1～1Nr H-Cl（或NaOH）对培养基的pH值进行调整，一般保持在5.4～6.0左右为好。可用pH试纸或酸度计进行测试。经高压灭菌后pH值又会下降0.1～0.3左右。pH值的调整有的在灭菌前进行，也有的在灭菌后进行。 4 培养基的分装；配制好的培养基要趁热分装。分装时要掌握好分装量。太多既浪费培养基，又缩小了培养材料的生长空间；太少则又影响生长，一般是占试管、三解瓶等培养容器的1/3～1/4左右为宜。分装时注意不要把培养基沾到管壁上，以免招致杂菌的危害，分装后立即塞上棉塞或加上盖子。有不同处理的还要及时做好标记。 * * 植物组织培养 通常是用植物的各种组织，包括有性的和无性的组织碎片及单细胞，在人为控制的环境里，用含有大量元素和微量元素的无机盐、有机生长物质和糖类等的液体或琼胶培养基，加以培养，使其先长出愈伤组织，然后诱导愈伤组织生根、发芽，长成完整的新植株。 组织培养的应用 1 无性系快速繁殖： 濒危植物，名优特新产品。利用组织培养使其再生小植株，并在试管内大量繁殖，这是目前植物最快速的繁殖方法。 当今，全世界植物组织培养工厂的年产值已达数十亿美元。试管苗的工厂化已成为一种不可忽视的新兴产业。 2 种质的保存和基因库的建立 3 花药培养和花药单倍体育种 4 药用植物的工厂化生产 5 突变体的筛选培育 组织培养的优越性 (一)培养条件可以人为控制 植物组织培养中植物材料完全是在人为提供的培养基质及小气气候环境条件下进行生长的，摆脱了大自然中四季、昼夜变化频繁，还刁；时受灾害性气候影响的刁；利因素，并且条件均一，对植物生长有利，便于稳定地生产大量苗木。 (二)生长周期短、繁殖率高 由于植物组织培养可以人为控制培养条件，可根据不同植物不同离体部位的不 同要求而提供不同的培养条件，因此培育幼苗生长快，繁殖率高，能及时提供规格 整齐一致的优质种苗。如一个杨树腋芽，利用组织培养技术一年可生产100万棵苗木。一个苹果树的茎尖，一年内能繁殖出1000亿棵苗木。由于繁殖系数极大，因而 能在短期内生产大量苗木。 组