动物性食品中炭疽杆菌检验.ppt

知识目标： 了解炭疽杆菌的生物学特性 掌握炭疽杆菌常规检验方法 掌握炭疽杆菌的卫生评价与处理 炭疽杆菌是炭疽病的病原体。炭疽病是一种散发性或地方流行性人畜共患传染病。家畜中以牛、羊、马最易感，多呈败血性经过。猪具有一定抵抗力，常限于局部感染。猫、小鼠、豚鼠及某些野生动物也可感染。炭疽病是皮毛加工人员、农牧民、兽医人员的一种职业病。人食用炭疽病畜肉或含炭疽芽胞的食物和水也可引起炭疽病。屠畜炭疽可分为败血型和局限型两类，牛、羊常呈急性经过，突然倒地，呼吸 一、生物学特性 形态与染色特性 炭疽杆菌菌体粗大，两端平截或凹陷，是致病菌中最大的细菌。排列似竹节状，无鞭毛，无动力，革兰氏染色阳性。 荚膜 在人及动物的病料中常单独存在或连成短链，且形成荚膜。荚膜的抗腐能力大于菌体，因此在腐败材料中常只能看到无内容物的荚膜—“菌影”。 芽孢 本菌在氧气充足，温度适宜（25～30℃）的条件下易形成芽胞，芽胞形成后自菌体脱离，故陈旧培养物只能看到芽胞而不见菌体。 培养特性：本菌为需氧或兼性厌氧菌，12℃～44℃都能生长，最适温度为30℃～37℃，最适pH值为7.2～7.6。 在普通平板上，经37℃ 24小时培养后形成2～6mm、扁平、灰白色、干燥、不透明、无光泽、边缘不整齐的粗糙型菌落，低倍镜观察，边缘为卷发状。 在50%血清琼脂上，于含65%CO2环境中，形成光滑、致密、有光泽、粘稠的细小菌落，并具有荚膜。 在血平板上，呈灰白色，表面粗糙、无光泽、不透明、边缘不整齐的菌落。一般不溶血，时间长时可有轻微溶血现象。 在肉汤中形成絮状沉淀，摇动时可有线状物上升，肉汤上层清亮，无菌膜或菌环。 低倍镜或放大镜观察菌落的边缘呈卷发状(主要是长链组成) 生化特性 本菌能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、果糖、蕈糖，产酸不产气。不分解乳糖、卫矛醇、甘露醇、鼠李糖以及阿拉伯胶糖。 能还原硝酸盐，不产生靛基质及硫化氢，V-P试验不定。 在牛乳中能生长，使牛乳先凝固，后缓慢胨化。 明胶穿刺培养能缓慢液化明胶，使表面液化成漏斗状，细菌沿穿刺线生长呈试管刷状。 抗原性：炭疽杆菌的抗原有四种：荚膜多肽抗原、菌体抗原、芽胞抗原和保护性抗原。此外，还有三种炭疽毒素复合物，即因子Ⅰ（水肿因子）、因子Ⅱ(保护性抗原）、因子Ⅲ（致死因子），这三种因子单独无生物活性，但因子Ⅰ与因子Ⅱ，因子Ⅱ与因子Ⅲ或三种因子同时存在时，则具有生物活性，表现出毒性作用。 抵抗力： 炭疽杆菌繁殖体的抵抗力不强，加热至60℃ 30分钟可以将其杀死，也易被一般的消毒剂杀灭。 炭疽芽胞的抵抗力很强，在自然环境中能存活数十年，在皮毛中能存活数年。煮沸15～20分钟或于121℃高压5～10分钟才可将其杀死。 该菌对化学药剂有抵抗力，5%来苏儿中2小时，新配制的20%石灰乳，20%漂白粉液需浸泡48小时才能将其杀死。 该菌对碘及氧化剂较敏感，1：2500碘液10分钟可将该菌杀死。 该菌对磺胺类、青霉素、链霉素、红霉素及氯霉素等抗生素均较敏感。 对多粘菌素及新霉素不敏感。 二、检验  样品的采集及处理 动物样品的采取：草食动物感染后多为急性经过，不得屠宰和解剖，可取耳尖部的末梢血液检查；猪炭疽则多为局限性，可采取有病变的颌下淋巴结、颈淋巴结及扁桃体。 病人材料的采取：皮肤炭疽主要采取病灶渗出液或脓液，肺炭疽则采取痰，肠炭疽则采取血液、粪便或呕吐物。脑膜炎则取脑脊液，伴有败血症者则采血液进行检查。 其它材料的采取：为了检查外环境是否污染炭疽杆菌，可采取土壤、毛发、骨、皮革、羽绒及处理皮革和羽绒的污水等。土壤、毛发等样品用生理盐水浸泡振摇10～15分钟，取浸出液再进行离心沉淀，沉淀物加入到少量灭菌盐水中，65℃加热30分钟以杀死其它的杂菌。污水则取污水50mL，经3000转/分离心30～60分钟，吸取上清液（弃去中层），将上层的液体与沉淀物充分混合，经加热65℃ 30分钟处理备用。 一般内脏和血液标本可直接接种，如病畜用过磺胺治疗，应在培养基中加入氨息香酸（5mg/100mL）。如样品用氯制剂消毒过，则可用棉拭子蘸取无菌的2%硫代硫酸钠水溶液少许，然后取样。 以可疑的病料制成涂片，自然干燥后火焰固定，或用0.1%升汞固定5分钟杀死芽孢后染色，染色可用革兰氏、瑞氏等，陈旧的腐败材料用骆氏美蓝染色。在猪及人的皮肤炭疽病料中形态极不一致，菌数也少，菌体排列极不一致，有的呈S型，J型、O形或成堆的奇异排列。有的有荚膜，有的无荚膜，有时荚膜极厚。在腐败的材料中有时只见“菌影”及菌体碎片。 炭疽杆菌的分离培养可根据样品的不同而直接进行接种。因败血症死亡的动物用接种环取耳尖部的血液少许，接种血平板或选择性平板，如为病理组织，外表用烧灼灭菌后，用无菌尖刀剪出断面，用断面压印在血平板或选择性平板上，再用接种环划线分离