检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质.ppt

第2章组成细胞的分子 第一节 细胞中的元素和化合物 实验1：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质 实验：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质 实验原理：某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。 化学试剂+有机化合物→特定的颜色 ①还原糖 + 斐林试剂 砖红色沉淀 ②脂肪 + 苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ）染液→橘黄色（或红色） ③蛋白质 + 双缩脲试剂→紫色 ④淀粉 + 碘→蓝色 水浴加热 一、可溶性还原糖的检测： （1）原理：还原糖 + 斐林试剂 砖红色沉淀。 （2）选材：苹果、梨、白萝卜。含糖量较高，颜色为白色或近于白色的植物组织。 （3）检测过程： 水浴加热 振荡混匀 50～65℃水浴 加热2min 2mL组织样液 刚配制的斐林试剂2mL 呈现浅蓝色 变成砖红色（Cu2O） 还原糖：含有半缩醛羟基的糖类，主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。蔗糖、淀粉和纤维素属于非还原糖。 当质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液与质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液混合后，立即生成淡蓝色的Cu（OH）2悬浊液。 Cu（OH）2与葡萄糖、果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红色的Cu2O沉淀。因此，利用该反应，可证明样液中含可溶性还原糖。 R—CHO+2Cu(OH)2→R—COOH+Cu2O↓+2H2O 甲液乙液等量混合，现用现配，切不可分开滴加，或者久置后才用。 制备组织样液 梨或苹果 研磨 取5g，放入研钵中 洗净、去皮、切块 过滤 滤液 （用单层纱布） 显色反应 向试管中加入2ml组织样液 向试管中加入2ml新配制的斐林试剂或本尼迪特试剂 振荡混匀 50～65℃水浴加热2min 观察现象 观察溶液颜色变化：浅蓝色→棕色→砖红色 结论：生成砖红色沉淀，说明梨或苹果中含有还原糖。 砖红色的糖（还原糖）非（斐林试剂）常好吃 2 ml组织样液 2 ml新配制的斐林试剂 50?65℃水浴加热约2min 观察颜色变化 砖红色 浅蓝色 棕 色 【斐林试剂】：甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05 g/mL的CuSO4溶液，使用前等体积混合均匀（生成浅蓝色的Cu（OH）2悬浊液），现配现用（时间一长，Cu（OH）2 沉淀在溶液底部无法发生反应）。且需要水浴加热。 还原糖的检测结果 斐林试剂与可溶性还原糖在水浴热的条件下，生成砖红色的Cu2O沉淀。 -CHO+Cu(OH)2悬浊液 -COOH+Cu2O↓（砖红色） 二、脂肪的检测 （1）选材：经浸泡去种皮的花生种子。 （2）检测过程： 制片 选取最薄的切片置于洁净的载玻片中央 制成临时装片：滴1?2滴蒸馏水，盖上盖玻片 染色：在薄片上滴加2?3滴苏丹Ⅲ染液，染色2?3min 洗去浮色：用吸水纸吸去染液，滴加体积分数为50%的酒精1?2滴 镜检观察：在低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗粒，然后用高倍镜观察。 苏三（苏丹Ⅲ）送了我一个橘黄色的胭脂（脂肪） 切片：花生种子（浸泡３－４h），去皮，将子叶削成薄片。 视野中有橘黄色颗粒 橘黄色小圆颗粒即为脂肪颗粒 脂肪 + 苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ）染液 橘黄色（或红色） 注意事项： （1）若用花生种子作实验材料，必须提前浸泡3～4小时，浸泡时间短了，不容易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成形，切片要尽可能的薄。 （2）染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色（酒精能溶解苏丹Ⅲ），染色和洗浮色时间不宜过长。 三、蛋白质的检测： （1）原理：蛋白质 + 双缩脲试剂 紫色络合物 （2）选材：黄豆、鸡蛋清（稀释）、牛奶、豆浆 （3）检测过程： 2 ml组织样液 2 ml双缩脲试剂A液，摇匀 3-4滴双缩脲试剂B液，摇匀 观察颜色变化 紫色 双（双缩脲）子（紫色）弹（蛋白质） 将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而缩合成双缩脲。反应式为: 双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）在碱性环境（NaOH）中能和Cu2+作用生成紫色的络化物，这个反应叫做双缩脲反应。蛋白质分子中含有的肽键结构与双缩脲结构相似，因此，蛋白质也可与双缩脲试剂发生颜色反应。 双缩脲≠双缩脲试剂 无色 紫色 （创造碱性条件） （提供Cu2+） 双缩脲试剂B 3-4滴 双缩脲试剂A 2mL 2mL组织样液 在碱性条件（NaOH）下，蛋白质中的肽键（—NH—CO—）与Cu2＋作用生生紫色络合物。因此，操作时，应先加A再加B，且A多B少，如果B过量， Cu2＋的蓝色就会遮盖生成的紫色。 制备组织样液 黄豆组织样液（或鸡蛋清稀释液） 黄豆 浸泡 研磨 过滤 滤液 去皮、切片 蛋清液 鸡蛋 鸡蛋清稀释液 稀释 显色反应 向试管中注入2ml组织样液 向试