第八章RNA的生物合成和加工.ppt

第九章 RNA的生物合成和加工 本章提要： 重点了解DNA指导下RNA的生物合成 —— 转录，以及转录后的RNA产物（rRNA、tRAN和mRNA）前体的加工。此外，以RNA为模板合成RNA（RNA复制）、以RNA为模板合成DNA（反转录）过程也将予以介绍。 第一节 DNA指导下的RNA合成 转录： DNA指导下的RNA合成。在细胞核中进行。 启动子（promoter）:DNA上控制转录起始的一段特殊序列 终止子（terminator）: DNA上控制转录终止的区域. 转录单位：从起始到终止的转录区。 一 RNA合成反应： （1）由DNA指导下的RNA合成酶催化。 （2）反应需要：4种核糖三核苷酸、DNA模板、 Mg2+等二价阳离子。 （3）RNA链的延伸方向：5?3 （4） 合成的RNA链与DNA模板互补 （5） 合成反应可逆，由PPi水解推动。 RNA合成反应与DNA复制的差别： （1） RNA合成反应不需要引物 （2） DNA双链中通常只有一条链可以用于转录， 或者两条链中各取部分区域转录。 模板链、负链、反义链（antisense strand)： 用于转录的链（指导mRNA合成） 编码链 (coding strand) 、正链、有意义链： 与mRNA序列相同的链（与模板链互补） （3） RNA转录时，只需要局部解开DNA双链，形成转录泡（transcription bubble）；合成的RNA链游离存在。 二 RNA 转录： （一）细菌RNA聚合酶与转录： 大肠杆菌RNA聚合酶全酶：(?2??’?) 核心酶（core enzyme）：(?2??’) 亚基 RNA聚合酶亚基功能： ? 酶的装配； 与启动子上游元件和活化因子结合 ? 借疏水作用结合于DNA上； 催化核苷酸聚合，形成磷酸二酯键 催化反应中心 ?’ 为碱性蛋白，借静电力与酸性DNA模板结合, 2Zn2+ ? 引导核心酶识别启动子并与其稳定结合,促进转录起始 ? 未知 原核生物的转录过程 终止因子 37oC，20~40nt/秒 （二） 真核生物RNA聚合酶： 真核生物RNA聚合酶含有与E. coli RNA聚合酶?、?和?’相应的亚基，但没有?亚基对应物。必须借助多种转录因子才能结合到启动子上。转录过程与原核生物类似。 RNA聚合酶 功能 对?-鹅膏 蕈碱 定位 I 转录45S rRNA前体，加工后为5.8S、18S和28S rRNA 不敏感 核仁 II 转录所有编码蛋白的基因（m RNA）及大多数核内小r RNA（snRNA） 敏感 核质 III 转录小RNA基因，包括tRNA ，U6snRNA和scRNA 中等 核质 三 转录的起始、终止与调节控制： （一）转录的起始与启动子（promoter） 1. 转录时DNA上核苷酸编号： 按照与转录RNA序列相同的一条链（编码链）编号，方向为由5’?3’。 上游（负数码）——起点Nt（+1）——下游（正数码） 2. 启动子: 是控制转录起始的一段（或多个）特殊DNA序列，位于编码序列上游，自身不被转录。 3. 细菌启动子中特征保守序列： ① -10序列（Pribnow box）： 起点上游 -5 ~ -9bp处：-TATAAT- 是开链处，该序列决定起始时DNA双链解开的速度。 ② -35序列： 起点上游约-35bp处：-TTGACA- 缺少-35序列的启动子，转录速度几乎为零。 ③上游元件(up element)：-40 ~ -60,可提高转录活性30倍 4. 真核生物的启动子： （1）真核生物的启动子类型： ① TATA box （ Goldberg-Hogness box ）： 起点上游-20 ~ -30bp处：- TATAAA-，对应于原核的-10 序列，使转录精确起始。 ② CAAT box： -70 ~ -78bp, - GCCAAT- ③ GC box：-80 ~ -110 bp，GCCACACCC或 GGGCGGG ④ 八聚体框：含8bp，-ATGCAAAT- TATA bo