细胞培养（CellCulture）.ppt

◆ 潜伏期（Latent phase）： 细胞从接种到贴壁生长繁殖的一段时间。 二倍体细胞该期时间长（24~96h）； 连续细胞系时间短（10~30min）。 ● 细胞附着于底物上，游离期 结束。细胞株平均在10分钟一4小时贴壁。 底物：胶原、玻璃、塑料、其它细胞等 ● 血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素、胶原等糖蛋白（生长基质），这些带正电荷的糖蛋白的促贴壁因子先吸附于底物上，悬浮细胞再与吸附有促贴壁因子的附着。 ◆ 指数生长期（Logarthmic growth phase）： 细胞增殖最旺盛时期，一般用细胞分裂指数（Mitotic index，MI）表示，即细胞群中每1000个细胞中的分裂相数。体外培养细胞分裂指数介于0.1~0.5%，且受细胞种类培养液成分、pH、温度等影响。 细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究 指数生长期是细胞活力最好的时期，在接种细胞数量适宜情况下，指数生长期持续3-5d后，随细胞数量不断增多，生长空间日趋减少，细胞相互接触汇合成片，呈现接触抑制（Contact inhibition）。而恶性细胞则无接触抑制现象，因此接触抑制可作为区分正常与癌细胞标志之一。 癌细胞则由于营养成分的消耗和细胞代谢产物的影响而发生密度抑制（Density inhibition） ◆ 停止期（平台期） 细胞达饱和密度, 可存活 仍有代谢活动，但基本不分裂，  细胞数量维持在某一水平上， 生长 活动停滞 机制：接触抑制、密度依赖性 5、培养细胞的遗传学特征 二倍体细胞 异倍体 干系 标记染色体 巴氏小体 Y小体 6、体内外细胞的差异 总体： 与体内仍有相似-- 体外培养的细胞仍存在细胞和细胞、 细胞和基质的相互关系 但有不同 相对孤立、相对单一 失去原有组织结构和细胞形态 分化减弱或不显 ◆ 培养的细胞之间 仍有在形态和机能上的相互依存关系。 在结构上，如：上皮细胞仍见有桥粒 在生理活动上，单个细胞虽能生长繁殖,但不如群体细胞能力强，当相邻细胞接触，便导致运动停止 ◆ 培养的细胞对细胞外基质仍有依存性 相同点： 不同点： ◆ 失去原有组织结构和细胞形态 如：肌肉细胞—纤维化◆ 分化减弱或不显 出现类似“返祖”现象：细胞趋向单一化  或获得不死性或变成具有恶性性状的细胞群 ◆ 因此要正确认识体外培养细胞 是一种特定条件下生长的细胞群体 7、培养细胞分化的改变 不适应（Deadaption） 细胞在体内时所拥有的分化特性减弱或不显。例如肝细胞在体外丧失了产生酪氨酸转移酶的特性。 脱分化（去分化）（Dedifferentiation） 由于基因变异而使细胞失去分化能力。如肝细胞失掉产生精氨酸酶及氨基酸转移酶的特性后，储存肝糖元的能力丧失，并很难再现。 不适应和脱分化两个概念不同： 不适应是因为生存条件改变而使分化发生抑制；而从分子水平考虑，脱分化很可能是基因变异所致。 * 干系：当某一核型的细胞在该细胞群体中居多数时，具有该数值染色体数的细胞群称为干系 标记染色体：在各类培养细胞中，有时可见异形染色体；如：双着丝点、环形染色体、长臂或断臂缺失等，当某一特殊形态的染色体不断反复出现并占很大比例时，这种染色体称为。。。 巴氏小体：女性的两条X染色体有一条在间期明显异固缩，呈三角形或半月状小体，紧贴在核膜内侧 Y小体：男性Y染色体在间期形成颗粒状Y小体，位于胞核的近中央部位 * （5）细胞转化（transformation） ◆ 细胞转化 正常细胞在致变因素作用下，发生了遗传型改变和表型的变化（涉及DNA或基因的改变）。细胞发生转化后的性状可代代相传。 可分为：自发转化（原因不明） 人工诱变（物理、化学、生物诱变剂） ◆ 一般转化：细胞获得不死性，尚无恶性 ◆ 恶性转化：有致瘤性 不仅能自主增殖，还呈现侵袭性生长和转移性。 细胞转化或基因突变不一定就是癌变！ （6）细胞克隆与细胞株 ◆ 细胞克隆（cell clone） 由单个细胞通过有丝分裂形成的细胞群体。 ◆ 细胞株（cell strain ） 通过选择法或克隆形成法，从原代培养物或细胞系中获得的稳定的具有特殊性质或标志的培养物。 如：温度敏感突变株 Section 1：培养细胞的生物学特征 ◆ 动物细胞与组织培养基本概念 ◆ 动物细胞与组织培养