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生物芯片制备方法-基片处理封闭 本节主要以目前应用较广的微阵列芯片为例介绍生物芯片的制备方法。微阵列芯片的主要原理是在活化的上利用机械或化学的方法制备各种生物分子包括DNA、蛋白质等的矩阵排列。 图1：百级洁净间图例。摘自Telechem公司网页。 9.1基片处理 制备微阵列芯片常用的材料包括无机材料如玻璃、硅、金聚合物材料等。目前采用较多的是玻璃。 9.1.1 氨基基片和环氧基基片的制备 前文已经提到，氨基基片和环氧基基片的制备通常通过硅烷化试剂在玻璃表面的反应来得到。反应原理见图2。 图2：氨基基片和环氧基片反应原理 将清洗干净的玻璃（-OH表面）在硅烷化试剂（含有氨基或环氧基基团）溶液中反应一定时间后就可以得到氨基或环氧基基片。其它如巯基基片也可以通过类似反应得到。 9.1.2 醛基基片的制备 在完成氨基基片或环氧基基片制备后，用戊二醛作用于氨基基片，或者用NaIO4作用于环氧基基片均可以得到醛基基片。 图3：醛基基片制备原理 9.1.3 PLL基片的制备 将清洁的玻在聚赖氨酸溶液浸泡处理即可以得到聚赖氨酸片。而且PLL片的制备过程较醛基、片都要简单的多，因此在生物芯片中常常用到。赖氨酸是一种碱性氨基酸，在通常的pH环境下带正电。多聚赖氨酸也带有大量的正电荷，经过清洗处理过的玻璃表面（富含-OH）带有大量的负电荷，所以多聚赖氨酸可以以静电相互作用力结合于玻璃的表面。而DNA分子的核糖骨架链带有大量的负电荷，可以被多聚赖氨酸吸附在玻璃的表面。.2节 微阵列制备点样 现代微阵列制备的三种主要方法是接触式点样、非接触式点样和半导体技术。接触式点样中，点样元件或者点样元件中的液体需要与基片表面直接接触。常用的接触式点样元件包括微点样针、镊子、开叉针、毛细管、实心针和针环结构。可以连续点样的非接触式点样方法包括基于压电或微线圈阀的喷样技术和热气泡喷射技术。半导体方法是基于微电子工业中广泛使用的微加工方法。光掩膜引导原位合成和微镜技术可以用逐步合成的方法制备密度为400 000点/cm2的寡聚核苷酸微阵列。 在三种主要微阵列制备方法中，接触式点样方式最为研究机构所广泛应用。由Telechem公司的Martinsky发明的微点样技术已成为广泛应用的微阵列制备方法。这种接触式点样方法中，运动控制系统上装有夹具或者点样头以及一根或者多根微点样针（如图3.2.1），根据需要制备化学或者生物样品的微阵列。点样头上用来放置钢针的各个孔的尺寸公差很小，这样使得钢针与孔间形成一个“气垫”。这个气垫可以使得针与孔间几乎没有摩擦，从而根本上避免了钢针的磨损和润滑剂的使用。针的尾部有一个方形限位块，可以在点样头的方形槽中上下滑动，并防止点样过程中钢针在孔中转动，从而大大提高点样的精度。 微点样针的头部有一个样品通道，用来存放一定体积的样品。因为针尖用电火花方法加工，样品通道可以定制以存放特定量的液体。设计的关键是每根钢针都有一个平头，这样吸样后钢针的头部就会形成一个薄膜。因为尖部有样品存在，微点样针可以按照印章的方法进行点样，即钢针尖部的样品在样品和玻片间的表面张力作用下被“拉”下来从而点制到玻片上（如图3.2.2）。 毛细管是最早的通过毛细作用装样的微阵列点样工具。毛细管是中空的圆柱体，在毛细作用下可以将液体吸入管内，最早的应用是在上世纪八十年代中期的Chloramphenicol Acetyl Transferase实验中用毛细管把样品点在基片上。上世纪九十年代初期，Engelhardt分子生物学研究所（莫斯科）的Mirzabekov和他的同事第一次将毛细管作为微阵列制备工具使用。在他们的工作中，毛细管被用来将DNA溶液转移在用丙烯酰胺包覆的玻片表面上。在九十年代中期，Molecular Dynamics公司的研究人员则用毛细管直接在玻片上点样了（如图3.2.3）。毛细管的可加工性要相对好一些，同时寿命也长一些。毛细管的劣势在于其严密的结构造成点样循环间的清洗困难，尽管改进的清洗方法已经极大的克服了这个问题。毛细管点样方法正在很多公司得到应用，制备的微阵列的质量很好。 非接触式微阵列制备方法包括各种微阵列制备中不需点样元件和微阵列基片间直接接触的各种技术。非接触式点样工具包括采用压电晶体或者基于微线圈阀的喷涂技术，以及热气泡喷液技术。在三种主要微阵列制备技术中，非接触式在硬性表面上点样的速度最快。 压电喷样系统利用了陶瓷等特殊物质在电压脉冲作用下变形的特性。产生压电效应的原件被称为压电传感器。如果压电传感器环绕充有试剂的毛细管，电压脉冲施加在压电传感器上可以使毛细管内产生瞬间压力波，而每个压力波都可以从喷嘴内喷出一小滴液体（如图3.2.4 a）。