2011版生物一轮精品复习学案：1.1 DNA重组技术的基本工具、基因工程的基本操作程序（选修3）.docVIP

选修3 专题1 基因工程 1.1 DNA重组技术的基本工具 1.2 基因工程的基本操作程序 【高考目标定位】 1、基因工程的诞生 2、基因工程的原理及技术 【考纲知识梳理】 一、与DNA分子相关的几种酶及基因工程的其他工具 1、与DNA分子相关的酶 限制酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 解旋酶 作用底物 DNA分子 DNA分子片段 脱氧核苷酸 DNA分子 作用部位 磷酸二酯键 磷酸二酯键 磷酸二酯键 碱基对间的氢键 作用结果 形成粘性末端或平末端 形成重组DNA分子 形成新的DNA分子 形成单链DNA分子 2、载体 （1）条件： ①能在宿主细胞中稳定保存下来并大量复制。 ②有一个至多个限制性核酸内切酶切割点，以便与外源基因连接。 ③具有特殊的标记基因，便于筛选。 （2）种类： 质粒（常用）、γ噬菌体的衍生物、动植物病毒。 （3）作用： ①作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内； ②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 二、基因工程基本操作程序[K] 1、目的基因的获取途径 （1）目的基因： 编码蛋白质的结构基因 。 （2）原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法。 （3）PCR技术扩增目的基因 ①原理：DNA双链复制 ②过程： 第一步：加热至90～95℃DNA解链； 第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链； 第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。 2、基因表达载体的构建 （1）目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。 （2）组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因 ①启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。 ②终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段 ，位于基因的尾端。 ③标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。 3、将目的基因导入受体细胞 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转化法 显微注射技术 Ca2＋处理法 转化过程 将目的基因插入Ti质粒的 T—DNA上→农杆菌→导入 植物细胞→整合到受体细胞 的DNA→表达 将含有目的基因的表达载[高考资源网]a2＋处理细胞→微生物细 胞壁的通透性增加→重组 质粒与感受态细胞混合→ 感受态细胞吸收DNA分子 4、目的基因的检测与鉴定 （1）分子水平检测 ①导入检测：DNA分子杂交技术，即使用放射性同位素标记的含目的基因的DNA片段作探针。 ②表达检测： 转录检测：分子杂交法，即目的基因作探针与mRNA杂交 翻译检测：抗原─抗体杂交法 （2）个体生物学水平鉴定：对转基因生物进行抗虫或抗病的接种实验。 【要点名师精解】 基因工程的操作程序 1、获取目的基因的[高考资源网KS5U.COM] 2．目的基因与运载体结合（以质粒为运载体） 3．将目的基因导入受体细胞受体细胞：细菌 ↓氯化钙 细胞壁的通透性增大 ↓ 重组质粒进入受体细胞 ↓ 目的基因随受体细胞的繁殖而复制 27．（8分）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，圈l、圈2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题： （1）一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有 ▲ 个游离的磷酸基团。 （2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越 ▲ 。 （3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Srna Ⅰ切割，原因是 ▲ 。 （4）与只使用EcoR I相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止 ▲ 。 （5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入 ▲ 酶。 （6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 ▲ 。 （7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在 ▲ 的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。SmaⅠ的切点，因此被改酶切割后，质粒变为线性双链DNA分子，因每条链上含有一个游离的磷酸基团，因此切割后含有两个游离的磷酸基团。 由题目可知，SmaⅠ识别的DNA序列只有G和C，而G和C之间可以形成三个氢键，A和T之间可以形成二个氢键，所以SmaⅠ酶切位点越多，热稳定性就越高 质粒抗生素抗性基因为标记基因，由图2可知，标记基因和外源DNA目的基因中均含有SmaⅠ酶切位点，都可以被SmaⅠ破坏，故不能使