2011版生物一轮精品复习学案：专题5 DNA和蛋白质技术（选修1）.docVIP

专题5 DNA和蛋白质技术 【高考目标定位】 1、蛋白质的提取和分离 2、PCR技术的基本操作和应用 【考纲知识梳理】 一、DNA的粗提取与鉴定 1、实验原理：DNA与杂质的溶解度不同，在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，在0.14mol/l的NaCl溶液中溶解度最低。 2、实验设计： ①实验材料的选取：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是使用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。 ②破碎细胞：动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。 ③去除滤液中的杂质：利用DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同，控制NaCl溶液的浓度去除杂质。 ④DNA的析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等、冷却的酒精溶液，静置2～3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。 ⑤DNA的鉴定：取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。 二、多聚酶链式反应扩增DNA片段 1、PCR原理：DNA的热变性 2、PCR反应过程：一般要经历三十多次循环，每次循环可分为变性→复性→延伸三步。 3、PCR技术中控制不同温度的意义 （1）90℃以上时变性，双链DNA解聚为单链； （2）50℃左右时复性，两种引物与两条单链DNA结合； （3）72℃左右时延伸，TaqDNA聚合酶促使DNA新链的合成。 三、血红蛋白的提取和分离 1、方法及原理 方法 原理 凝胶色谱法 根据相对分子质量的大小分离蛋白质 电泳法 各种分子带电性质的差异以及分子本身大小、形状的不同来分离蛋白质 2、操作程序： （1）样品处理： 红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红蛋白溶液 （2）粗分离——透析：除去样品中相对分子质量较小的杂质。 （3）纯化：一般采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化。 （4）纯度鉴定：一般用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法来测定蛋白质的分子量，即对血红蛋白进行纯度鉴定。 3、细胞内DNA复制与PCR技术的比较 细胞内DNA复制 PCR 不同点[高考资源网][高考资源网KS5U.COM][高考资源网][高考资源网KS5U.COM] PCR技术——扩增蛋白质 B.杂交瘤技术——制备单克隆抗体 C.光学显微镜——观察叶绿体的基粒 D.花粉离体培养——培育单倍体植物 【解析】本题主要考查学生的理解能力。PCR技术只能用来扩增核酸，不能用来扩增蛋白质；利用光学显微镜无法观察到叶绿体。 【答案】BD （2010·江苏高考）32．(7分)某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动。具体步骤如下： 材料处理：称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2份．每份l0 g。剪碎后分成两组，一组置于20℃、另一组置于一20℃条件下保存24 h。 DNA粗提取： 第一步：将上述材料分别放人研钵中，各加入l5 mL研磨液，充分研磨。用两层纱布过滤． 取滤液备用。 第二步：先向6只小烧杯中分别注人10mL滤液，再加人20 mL体积分数为95％的冷酒精 溶液，然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒上。 第三步：取6支试管，分别加入等量的2 mol／L NaCl溶液溶解上述絮状物。 DNA检测：在上述试管中各加入4 mL二苯胺试剂。混合均匀后，置于沸水中加热5 min，待试管冷却后比较溶液的颜色深浅,结果如下表。 分析上述实验过程，回答下列问题： (1)该探究性实验课题名称是 ▲ 。 (2)第二步中”缓缓地”搅拌，这是为了减少 ▲ 。 (3)根据实验结果，得出结论并分析。 ①结论1：与20℃相比，相同实验材料在-20℃条件下保存，DNA的提取量较多。 结论2： ▲ 。 ②针对结论I．请提出合理的解释： ▲ 。 (4)氯仿密度大于水，能使蛋白质变性沉淀，与水和DNA均不相溶，且对DNA影响极小。为了进一步提高DNA纯度，依据氯仿的特性．在DNA粗提取第三步的基础上继续操作的步骤是： ▲ 。然后用体积分数为95％的冷酒精溶液使DNA析出。23．下列关于DNA和蛋白质提取与分离实验的叙述，正确的有 A．提取细胞中的DNA和蛋白质都需用蒸馏水涨破细胞 B．用不同浓度NaCl溶液反复溶解与析出DNA可去除蛋白质．蛋白质提取和分离过程中进行透析可去除溶液中的DNAD．蛋白质和DNA都可