酶学2004.09.9幻灯片.pptVIP

四、酶反应速度概念 酶的反应速度用单位时间内单位体积中底物的减少量来表示。酶速度单位：底物变化量/单位时间。 时间 底物浓度减少量 斜率=浓度/时间=v 图t1时间之内，酶促反应速度保持恒定。随时间延长，酶促反应速度下降。 t1 因此，测定酶促反应速度应该以初速度为准。 为了检验酶反应和测定反应系统是否正常，通常在测定时应该先制作两种曲线(直线)。(1)酶反应进程曲线，进而确定每反应初速度(如上图)。(2)根据酶反应初速度制作酶浓度曲线 t2 其原因主要有：反应体系底物浓度下降，酶在一定pH及温度下部分失活，产物浓度增加对酶产生抑制及加速了逆反应速度等。 CH2-CH2-C-OCH2-CH3 =O H+ O H H ∶ CH2-CH2?C?O-CH2-CH3 =O H + ?+ CH2-CH2-C-OH+HOCH2-CH3 =O 第四节酶促反应动力学 主要研究酶反应速度规律以及各种因素对与酶反应速度的影响。 一、底物浓度对酶促反应速度的影响 [S]? V ? 一级反应 混合级反应 零级反应 反应体系[E]浓度保持恒定，增加[S]，测定底物变化量，得如下曲线。1902年 Brown首先提出中间复合物学说。 Vm 中间复合物学说： E + S ? E-S ? E + P E—表示游离酶 S—表示游离底物 E-S—表示酶-底物络合物 P—酶作用的产物 产物P的生成速度代表整个酶催化的反应速度。而产物的生成速度取决于[ES]。因此整个酶反应的速度取决于[ES]大小。 曲线特征： [S]很小(低)时，酶促反应速度与[S]成正比，表现为一级反应。 [S]再增大， V不再按正比升高。表现为混合级反应。 [S]增大到一定程度， V不会随[S]增大而增加，表现为零级反应。并接近最大反应。 E + S ? E-S ? E + P 当底物浓度比较高时，溶液中的酶全部与底物结合成中间络合物，没有游离的E。增加底物浓度也不会有更多的中间络合物形成，此时底物浓度与反应速度几乎没有关系。反应达到最大反应速度。 二、米氏方程的导出 E + S ? E-S ? E + P 1913年Leonor Michaeli Maud Menten建立了十分简单的动力学方程比较准确地反映了酶促动力学原理。1925年Briggs Haldane对米氏方程作了修正。 酶促反应分步进行，第一步是E与S结合生成酶-底物络合物(ES)，经催化生成产物P并脱离酶。 K1 K2 K3 K4 产物P的生成速度代表整个酶催化的反应速度。而产物的生成速度取决于[ES]。因此整个酶反应的速度就取决于[ES]。 ES的形成量不仅与E+S有关，而且与P+E有关。当[S]很低酶反应处于初速度阶段，P的量更少，P+E生成ES的速度极小，可以忽略不计。 故ES生成速度只与反应E + S ? E-S 有关。因此： K1 ES的形成速度=K1[E][S] ES的分解速度=(K2+K3)[ES] E + S ? E-S ? E + P K1 K2 K3 K4 从平衡式 可知：酶催化反应速度取决于产物的生成速度，即反应体系中[ES]以及速度常数K3。 V=K3[ES] 当整个酶反应体系处于动态平衡，即ES的生成速度等于分解速度，此时有： K1[E][S] = (K2+K3)[ES] [ES]= K1[E][S] K2+K3 = [E][S] K2+K3 K1 (1) (2) K1 [ES]= [E][S] K2+K3 令： K2+K3 K1 Km= 并代入上式，可得： [ES]= [E][S] K2+K3 K1 [E]?[S] = Km [E]代表的是未与底物结合的游离酶浓度，即： [E]=[Et]–[ES] (3) 代入上式(3)，可得： [ES]= [E][S] Km ([Et]–[ES])?[S] Km = (4) 整理(4)式，得： [ES]= [Et]?[S] Km+[S] 因为： V=K3[ES] 所以： V=K3[ES] K3[Et]?[S] Km+[S] = (引入米氏常数) V=K3[ES] K3[Et]?[S] Km+[S] = 当底物浓度达到很高时，所有酶都被S结合成[ES]，即 [Et]=[ES] 此时，酶促反应达到了最大反应速度： Vm= K3[ES] = K3[Et] 代入上式，可得： V= K3[Et]?[S] Km+[S] Vm?[S] Km+[S] = 上式则为修正后的米氏方程。 Vm?[S] Km+[S] V= (一)米氏方程讨论： V= Vm[ S ] Km +[ S ] = Vm[ S ] [ S ] =Vm=K3[ES] 零级反应 1.当[S]很低时，即 [ S ]＜＜Km, 但 [ S ] ＞＞[