男性不育的实验室诊断及评估-南京医科大学.ppt

男性不育的实验室诊断及评估 南京医科大学生殖医学重点实验室 周作民 ４．宫颈粘液穿透试验： 1)?? 体内试验：性交后试验（PCT） 注意事项：①排卵期进行 　 　　　　②禁欲至少2天 　　 　　　③最好在性交后9～24小时进行观察。 诊断标准：正常为宫颈粘液中的活动精子数50个/HP或 A级精子20个／HP 影响因素：①女方的内分泌状况。 　　　　　②宫颈粘液中的白细胞。 　　　　　③阴道pH，7或8.5可导致PCT异常。 ④宫颈结构异常。 ⑤抗精子抗体影响。 ⑥性功能异常,如阴道痉挛。 　　　　　⑦精子质量差。 2)?? 体外试验： ①??? 玻片试验 ②??? 精子－宫颈粘液接触试验 ③??? 毛细管试验: 穿透介质: 人宫颈粘液; 宫颈粘液代用品: 牛宫颈粘液; 含人血清精子营养液; 含牛血清白蛋白精子营养液; 鲜鸡蛋清; ５．精子顶体酶测定（明胶膜法）： 1)?制备5%明胶溶液，吸取100ul均匀涂于载玻片上，自然干燥，4℃湿盒备用，使用前用甲醛－酒精固定液固定60分钟。 2)?精子处理：取液化精液，用PBS稀释至2～4×106个/ml。 3)??涂片：取1滴精液涂于明胶膜上，37℃湿盒2小时。 4)?观察：于相差显微镜下计数有反应精子的百分率及精子的平均反应直径。 5)?正常值：平均反应率≥65%，平均反应直径≥25μm。 6．去透明带仓鼠卵穿透试验 1)?精子准备： ①?精液充分液化 ②?调整精子浓度至10×106个/ml ③?精子获能：取精液0.5ml，5%CO2，95%空气中， 37℃孵育18～24小时，调整精子浓度至4×106/ml。 * 维持男性生育的基本条件： （1）睾丸内产生足够数量的精子。 （2）精子在男性生殖管道内获得运动能力和 受精能力，既精子的成熟。 （3）输精管道通畅。 （4）具有正常的性功能。 （5）附属性腺功能正常。 不育症诊断的步骤： 1.?病史采集: 包括年龄、职业、生育史、疾 病史、家族史等。 2.??体格检查：包括外生殖器和全身体检。 3.??实验室诊断 4.??特殊检查 一、 精液常规分析 　　　　┌精子（5%） 精液组成┤　　　　　 ┌精囊腺液（60%）－凝固因子、果糖 　　　　└精浆（95%）├前列腺液（20%）－液化因子 　　　　　　　　　　 ├尿道球腺液（3%） 　　　　　　　　　　　└睾丸液、附睾液 ——精子 精液分段成分： 前段－睾丸液，附睾液（精子），尿 道球腺液 　　 中段－前列腺液 　　 后段－精囊腺液 精液变量的参考值： 精液量：2～6ml　　　 颜色：灰白 液化时间：60分 粘稠度：拉丝2cm pH： 7.2～8.0 活率：60% 活力： A+B50%或A25% 精子计数：2000万/ml 畸形率：30% 脓细胞： 5个/HP （1×106/ml) 精子活力分级 A 级：快速前向运动 B 级：慢或呆滞的前向运动 C 级：非前向运动 D 级：不动 影响精液常规数据准确性的因素： ①?自身的波动性: 要求首次检查应连续进行两次,间隔时间7 天—3周，两次结果差异大时应再检一次。 每周测定一次精子密度，连续120周，期间此人未服药，也无发热，结果显示精子密度可有显著性波动。 ② 禁欲时间：　要求2－７天 ③?采精方式：　要求用手淫法或取精器取精。 ④?盛精容器：　要求用对精子无毒性的玻璃或塑料容器。 ⑤?室温： 要求不低于20度 ⑥?观察时间： 要求精液液化后，取精后1小时内检测。　 ⑦?检测设备： 冬天检测应注意保温。 精液常规异常的分析： 1.?精液量异常 1)?无精液症：精液量0.5ml或无 病因：①性交不射精 　　　②逆行射精 2)?少精液症：精液量为0.5～2ml 病因：①性交频率过高　②附属性腺先天性发育